分泌期大鼠造釉胞中线状溶酶体及中间丝蛋白的研究.pdf

中文摘要 分泌期大鼠造釉细胞中线状溶酶体 及中间丝蛋白的研究+ 目 的 ／ ／牙釉质是一种覆盖于牙齿冠部表面的牙体硬组织，它是机体最坚硬的 组级，具有较强的耐磨性，对牙齿正常的咀嚼活动十分重要，并对深部的某 它牙体组织有很好的保护功能，也是保持牙齿美观、并进而维护面容美观的 重要因素。造釉细胞即是这种牙体硬组织的形成细胞。深入研究造釉细胞 的形态结构和功能，对于进一步认识牙釉质的发育机制，探讨釉质发育异常 的成因，都具有十分重要的意义。 根据研究报告，造釉细胞的增殖分化经历了四个时期：1 增殖期2 分 结构特点，观察到了两种形态的造釉细胞：纹状缘造釉细胞和非纹状缘造釉 细胞。Robinson等则从釉质发育过程的角度研究了造釉细胞功能的变化， 并提示造釉细胞的功能状态与釉质的发育过程紧密相关。Matsu等凡位学 者的研究向我们证明了在牙釉质发育过程中造釉细胞的高尔基复合体所发 生的变化，著者同时还分析了这种细胞器与牙釉质发育的关系。 溶酶体是一种运动细胞器，可呈现多种形态结构，线状溶酶体可能参与 细胞内的物质转运。机体的多种细胞中都有线状溶酶体的分布，包括造釉 细胞和牙龈结合上皮细胞。已经有研究证明，分布于成熟期造釉细胞中的 线状溶酶体与牙釉质基质的重吸收和降解关系密切。细胞骨架蛋白是细胞 - 骨架系统的构成蛋白，与细胞的功能活动紧密相关，中间丝蛋白正是其中的 ● 、 重要组成部分，它们不仅是保持细胞稳定的主要因素，而且可能涉及机械的 点、 运动和信号功能。可见中间丝蛋白在细胞功能活动中具有十分重要的作 用。sakai等的研究结果表明，完整的肌动蛋白丝和微管是线状溶酶体形成 的基础，同时中间丝可能也与线状溶酶体有一定的联系。然而，在分泌期 ‘国家自然科学基金课题 课题号：39卯0383 ·1· 造釉细胞中，是否有线状溶酶体的存在，它们的功能女咿，中间丝蛋白又有 怎样的作用，有关这些方面的研究报道目前尚很有限寸 为了揭示发育过程中造釉细胞中的线状溶酶体在釉质形成过程中的变 化及中间丝蛋白的作用，我们应用酶组织细胞化学、免疫组织细胞化学和 光、电镜技术以及组织细胞培养技术对分泌期大鼠造釉细胞中的线状溶酶 研究，探讨它们在牙釉质形成中的作用，分析牙釉质的形成机制，为进一步 研究釉质发育异常奠定基础，并为更有效地预防此类疾病的发生提供理论 依据。 实验方法 1．用乙醚麻醉生后1一10天的大鼠，以2％多聚甲醛和0．5％戊二醛混 合固定液 含8％蔗糖，pH7．3 进行心脏灌流固定，取双下颌切牙的牙胚， 用冰冻切片技术制作光镜切片，并用Gom0Ii的ACP鹊e组织化学方法染色， 运用电镜酶细胞化学技术制备电镜标本，以显示造釉细胞中的ACP踮e活 性和NLY的分布特点，在光学显微镜和电子显微镜下进行观察，同时利用 美国uIliversalMetaMorphousSystem图象分析系统检测不同日龄大 Ima西ng 鼠造釉细胞中ACPase的活性。 2．以同样的方法固定并取材后，制成石蜡切片标本，运用ABC免疫组 织化学方法显示这些造釉细胞中的Vim和cKl9，并借助光镜和电镜观察 其分布情况。 3．应用酶消化法分离大鼠的造釉细胞，以含10％胎牛血清的DMEM 为培养液，以多聚赖氨酸为基质，将分离后的造釉细胞以1．25×106个／IIll 的浓度接种于6孔培养板上，送入含5％cO：的培养箱中培养9—10天，隔 日更换培养液，并随时观察细胞的生长情况；10天后以相同的固定液固定， 经AcP鹊e酶细胞化学染色并制片后，在光镜和电镜下观察。 实验结果 1．光电镜及酶细胞化学染色结果： 在光学显微镜下，见分泌期大鼠造釉细胞呈柱状，紧密排列成一层，细 胞核远离基底膜，移向靠近中间层的一端，呈反向极化；随着大鼠日龄的增 ·2· 加，这些柱状细胞的高度亦有改变。在电子显微镜下，胞体呈柱状的造秸l细 胞排列于基底膜上，胞核呈椭圆形，胞浆内游离核糖体丰富，线粒体、内质网 和高尔基体的分布和数量在不同日龄的大鼠不甚一致，胞体的形态和胞核 的位置也因时间的不同而有差异，且随着日龄的增加，造釉细胞出现反向极 化，细胞顶端也有三角形或指状的Tom童突形成，在细胞顶端的胞膜内有膜 包分泌小泡分布，有时可见细胞分裂现象。 分泌期造釉细胞的酶组织细胞化学染色结果显示，光镜下在不同日龄 大鼠的造釉细胞中，均有ACPase阳性反应的棕黄色颗粒沉着，这些阳性反 应颗粒的沉积部位主要位于造釉细胞的顶端，或者说是靠近基底膜的一端， 硒ngMetaMorphous 鼠造釉细胞的灰度值分别进行了测定，其结果为：1天者56．15±6．1l，3天 ±33．06。运用sPSs软件系统进行统计学分析，结果各日龄组之间灰度值 反应的电子密度较高的溶酶体结构存在