大肠癌转移相关因dr-nm23功能初步研究.pdf

大肠癌转移相关基因DR-nm23功能初步研究 苏娟娟 中文摘要 目的： 胞株中的表达情况及其对大肠癌细胞株生物学行为的影响，探讨DR—nm23与大肠癌发 生、发展、浸润及转移的关系，并阐明其临床意义，为指导临床诊断、治疗及预后判断 奠定理论基础。 方法： 肠癌细胞株中，观察转染前后对大肠癌细胞株体内及体外侵袭转移能力的影响；并通过 统计分析得出结论。 结果： 关。 2．慢病毒构建，包装并稳定转染至SW620细胞株 I酶切pGc—FU载体使其线性化，把PCR扩增的目的基因片段交换进入线性 利用Age 化的pGC—FU载体，交换后转化细菌感受态细胞，对所得的阳性克隆PCR鉴定和DNA澳]序 进行滴度测定，所得的带有目的基因的慢病毒转染SW620细胞株。 3．DR-nm23基因过表达后对大癌细胞生物学特性的影响 1 观察体外细胞的增殖情况，与SW620和转染空载体的SW620细胞相比，转染目的 基因的SW620细胞增殖减慢，差异具有显著性意义 尺O．01 ；平板克隆形成实验也显示 转染目的基因的SW620细胞的单个细胞增殖能力较其它组显著减低，差异有统计学意义 尺0．01 ，这些结果均说明DR—run23基因过表达后，肿瘤细胞体外生长被显著抑制。 胞的体外运动能力。 3 通过皮下成瘤实验观察DR-nm23基因过表达后对大肠癌细胞体内增殖能力的影 的皮下，通过30天连续的观察，发现DR-nm23基因过表达后，显著抑制了大肠癌细胞 的体内增殖能力。 4 通过结肠原位接种法体内转移实验，观察DR-nm23基因过表达后对细胞体内侵 只，约12．5％裸鼠形成肝转移。 结论： 1．成功筛选出无内源性表达DR-nm23基因的细胞株SW620。 2．成功获得DR-nm23基因稳定表达的大肠癌细胞株，为后续体内外实验研究 DR—nm23基因对人大肠癌细胞增殖，粘附和侵袭能力的影响奠定基础。 3．增殖实验、平板克隆实验和运动实验提示DR-rim23基因表达降低大肠癌细胞的体 外增殖及运动能力。 4．皮下成瘤实验及结肠原位接种法体内转移实验提示DR-rim23基因表达可显著抑 制大肠癌细胞的体内增殖及转移能力。 关键词：DR—nm23；NDPK；大肠癌：转移 2 The functionalofColorectalcancer Analysis DR-nm23 genes Su Juanjuan Abstract Object： DR-nm23waschoosed鹤the in gene of theresearch targetstudying project．From molecularto the ofDR-nm23incolorectalcancer biologystudyexpression cellsandits behaviortocoloncancercell the ofDR-rim23 biologicalImpact line,Discussion Relationship and c勉nogr colorectal andmetastasis its and clinical development,invasion clarify laidthetheoretical significance，to basisfor clinical and guide diagnosis，treatment prognosis． Methods： We the to Rr．PCRsel∞nand the lineswith colon∞nc砑cell apply identify high ofDR-nm23andwith expression loworno DR-nm23 in gene endogenousgene expression colon啪c盯cellline．We transfectedthe DR-nm23intothe stably gene coloreetfl observethe ofthecoloncancercellsinvivoandin expressed canP．料cell，to impact vitroinvasivebeforeandafter concludedstatistical ability transfection,and by analysis． Results： 1．DR-rim23inthreecolorectalcancercell andHT·29 lines：SW620，SW480 expression andclinical significance． 110 Thereis ofDR-nm23inthe