培养方法对土壤可培养细菌多样性影响.pdfVIP

第 46卷 第 6期 土 　壤 　学 　报 Vol46,No6 2009年 11月 ACTA PEDOLO GICA SIN ICA 　Nov. , 2009 培养方法对土壤可培养细菌多样性的影响 1 1 2 3 1 王 　萍 　崔中利 　刘 　标 　孙 　波 　曹 　慧 ( 1 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 ,南京 　2 10095) (2 国家环境保护部南京环境科学研究所 ,南京 　2 10042) ( 3 中国科学院南京土壤研究所 ,南京 　2 10008) 　　摘 　要 　　提高土壤微生物的可培养性 ,获得纯培养微生物菌株 ,是微生物生态学研究的基础 。采用三 种培养基对土壤细菌进行分时段计数 , 以细菌通用引物扩增细菌 16 S rDNA 片段 ,用限制性内切酶 H ha I酶切 PCR 产物 ,对酶切图谱进行分型 ,研究不同培养方法对土壤细菌多样性和可培养的影响 。结果表 明 , LB、 7 7 7 CSEA 、W SA 培养基 192 h后每 g干土获得的细菌数量分别为 14 84 ×10 、1027 ×10 和 69 1 ×10 CFU ,但微 生物多样性指数以 W SA 为最高 , LB 多样性指数最低 ;三种培养基培养的细菌菌群有一定的相似性 , LB 和 CSEA 培养基间的 J accard指数为 5769% , LB 和 W SA 培养基之间为 5313% ,而 CSEA 和 W SA 培养基的相似 γ β 性指数达 6667% ; 16 S rDNA 测序结果表明 ,所获得的土壤细菌优势种群在分类方面主要属于 和 变形杆 菌以及放线菌亚门,其中某些 O TU s中的 16 S rDNA 序列与 B u rkholderiaceae bacterium 、R hodococcus和 M y cobac terium 属具有较高的同源性 ,推测其细胞能够分泌复苏促进因子 ,有效地提高土壤细菌的可培养性 。 关键词 　　微生物多样性 ;可培养性 ; RFL P分析 ;培养基 ;培养时间 中图分类号 　　S154 34; Q9381　　　　文献标识码 　　A 　　土壤微生物具有极高的多样性 [ 1 ] ,在土壤生态 滴胶囊法 [ 12 ]和扩散小室法 [ 13 ] 等均是具有革命性的 系统形成与演化过程中发挥一系列重要的生态功 方法 ,能够很好地模拟原位环境条件 ,既有通用性又 能 ,如有机物的周转 、养分的释放 、腐殖酸的形成 、污 无需昂贵设备 。然而 ,土壤环境中存在某些菌体微 染物的降解 、土壤结构的改善等 [ 2 ～4 ] 。但 目前在实 小 、生长缓慢的微生物类群 ,适当延长培养时间有助 验室条件下采用纯培养方法所获得的微生物种类十 于其生长成为肉眼可见的菌落 ,但延长培养时间对 分有限 ,例如细菌域包括 23 门,但是大约只有 6 250 培养环境的无菌要求较高 , 目前研究仅限于对土壤 种是已知的[ 5 ] ,估计小于 1% 的微生物可以通过纯 细菌数量和菌落形态等方面进行分析 。 培养的方法来培养 [ 6, 7 ] 。大量的未培养微生物的存