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* 变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应:DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 热变性 解链曲线:如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图,所得的曲线称为解链曲线。 Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成,在这一范围内,紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度,又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 三、变性的核酸可以复性或形成杂交双链 DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下,变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性。 减色效应 DNA复性时,其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,这一过程称为退火(annealing) 。 在DNA变性后的复性过程中,如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中,只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系,在适宜的条件(温度及离子强度)下,就可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成,也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸杂交(hybridization) DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 第五节 核酸酶 核酸酶 (ribozyme) 1982年,Thomas Cech 在研究四膜虫26S大核rRNA前体的加工时发现rRNA前体本身具有自我催化作用,提出了核酸酶 (ribozyme)的概念; 核酸酶是所有可以水解核酸的酶,根据核酸酶底物的不同,可以将其分为DNA酶和RNA酶两类。 现已发现几十种核酶;根据对底物二级结构的专一性,还有单连酶和双链酶之分。 核酶的一级结构无特殊性,但某些二级结构对催化活性很重要; 最简单的核酶二级结构——锤头状结构 (hammerhead structure) 底物部分 通常为60个核苷酸左右 同一分子上包括有催化部份和底物部份 催化部份和底物部份组成锤头结构 核酸酶研究的意义 核酸酶的发现,对中心法则作了重要补充; 核酸酶的发现是对传统酶学的挑战; 利用核酸酶的结构设计合成人工核酸酶 。 第十三章 真核基因与基因组 课程内容 第一节、真核基因的结构与功能 一、真核基因的基本结构 二、基因编码区编码多肽链和特定的DNA分子 三、调控序列参与真核基因表达调控 第二节、真核基因组的结构与功能 一、真核基因组具有独特的结构 二、真核基因组中存在大量重复序列 基因的概念 基因(gene)是指能够编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的、负载遗传信息的基本单位,除了某些以RNA为基因组的RNA病毒外,通常是指染色体或基因组的一段DNA序列。基因包括编码序列(外显子)和编码区前后对基因表达具有调控作用的序列和单个编码序列间的间隔序列(内含子)。 基因组的概念 基因组(genome)是指一个生物体内所有遗传信息的总和。人类基因组包含了细胞核染色体DNA(常染色体和性染色体)及线粒体DNA所携带的所有遗传物质。 分子生物学的中心法则 第一节 真核基因的结构与功能 一、真核基因的基本结构 基因的基本结构包含编码蛋白质或RNA的编 码序列(coding sequence)及其与之相关的非编码 序列,包括编码区两侧对于基因表达具有调控作 用的调控序列和单个编码序列间的间隔序列。 基因的编码序列在DNA分子上是不连续排列的,被不编码的序列所隔开。称为断裂基因。 编码的序列称为外显子,对应于mRNA序列的区域,是一个基因表达为多肽链的部分。 不编码的间隔序列称为内含子,内含子只转录,在前mRNA(pre-mRNA)时被剪切掉。 真核生物的基因为不连续基因(interrupted或discontinuous gene)或断裂基因(split gene)。 外显子 内含子 外显子 外显子 外显子 内含子 内含子 二、基因编码区编码多肽链和特定的RNA分子 结构基因中的DNA序列决定了一个特定的成熟RNA分子的序列,换句话说DNA的一级结构决定着其转录产物RNA分子的一级结构,这一段DNA称为结构基因。 有的结构基因仅为一些有特定功能的RNA编码,如核糖体RNA(rRNA)、转运RNA(tRNA)等,而大多数结构基因则通过信使RNA(mRNA)进一步为蛋白质编码。 顺式作用元件: 一个基因的调控区和结构基因位于同一个DNA分子中的相邻部位,这种调节方式称为顺式调节,相应的调控序列称为顺式调控元件或称顺式作用元件(cis-acting ele
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