亚马逊利什曼原无鞭毛体的体外培养及鉴定.pdf

山西医科大学博士(硕七J掌何硷文 摘要 目的：建立亚马酮H寸曼原虫体外暗养体系以获焦挺氢掩稳棰引赫蟛E疫学及分子 生物学研究；j拦—步证明前辅旺纶降辑蛐够群睡引捌做j嘲寺尉生、基因表达水_平圾对宿 主的感染挣蛀。方法：我谨翅潋司砉养基，将小牛血}枞20％提高到50％，在体外俺 前鞭毛体转化为无鞭毛体，并在体外纯培养。然后对三种不同来源的无鞭毛体(动物皮 捌螈、J774国蝴胞鹬醐骡及前糇崮辑夸化)逆绗鉴怠尉觯克割亢f柏q阳胺 检汉4原虫{穆粥抗原的表比设计了编码P4、Gp—k5及e捌管蛋白孵}寺异引物，用于 lU=PCR分阮同时比饺了三懒的耐孵日袖q目噬宝田胞鹋撇，结果：三争嘲氆原 断喇晤澉到缝雕碴显帚f印确膨蠡学惭正!；删奇异鞠踊虢嘲锨胺兔卿黼 分j鼎镑圄怀同糊静顶斧旺体啦4和P-8)及嗣糖鲋娟刚矾仞瑚裂淀。P-4 和P-8单克隆抗体对三种无鞭毛体的染色呈阳性，而目浓晓及部位相似。而前鞭毛体仅 与P毒单竟隆抗体(mAb)有较弱的阳性反应。P-4mAb则无阳性反应。相反，aⅥ口Mz 单克隆抗体与静鞭毛体呈强阳性反应，却不与无鞭毛体出珊强阳性反应；用IrF-PCR分 掂矛睐洌陨．撷毛f描羽碧刳P4蒯崭}生带，且勰F捃‰葡生ii礴晰则评 钡孵4。相反，在i擗斛贝I惰Gp舶特异瞄蝴商敲§(325bp)，三j嗍毛2哼时噘I簸 毛I枯口是罨辕达。另外，三；l朔螈耐㈣目筮{{啦鲍恻摔均|妾i匣lO似a绪如 i恿j蓝l瘟改变(提高)将赫吒缃靴为础捶毛体后。将j蒯畔衄前獭躺Ⅱ 50％，衡瞒睡揪随鞠铹制狮日匕建立了Ⅲ吗逊币叶曼原虫巾蝌蠕脚陈。 j巾糯蝴芒萍强曙蹲在聪恭学k捌亢畴．特留湎、P-4越习对(平上、斌鳓刎抱感澡 榭蛄面{㈣同瞄撇。毗从赫畦槲绷俪釉呒睡晰为良盅黼元薇 毛f瓣富辩漾侮!卜嬲晚度芎蹲方耐础叶t鳓撼白勺f枘及体夕渐怒 斑i司：亚珊I胂曼触；黼陡体-强睫毛体．瞅麓瘦划缫郎淅；反车专 桑多聚晦％笔反应(RT-PCR) Ill Abstract establishtheaxenicculture the Objective：To for ofLeishmania system amastigotes amazonenMsandSOastogenerate of for and largequantity amastigotesimmunological molecularstudiesTofurtherassessthe characterizationto the biology antigenic anddetect levelsof andto the monitor tothe in expression genes host stage—specific infectivity different amastigote preparations(promastigote·derived invitro via transformationfrom andmaintained generatedamastigotes promastigotes jn culturea axenic modified