小鼠精原干细胞外分化及相关基因表达的研究.pdfVIP

中文摘要 目的：体外培养小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,mSSCs)，并通过全反 式视黄酸（ATRA, all-trans retinoic acid ）进行诱导分化，观察小鼠精原干细胞在诱导中 的变化情况，检测Stra8、mina53 、Oct-4、GCNF 在mSSCs 体外分化中的表达，有助于 研究精原干细胞体外分化的最佳条件和分子生物学特性，从精原干细胞体外分化的角度理解 和认识此过程基因表达调控机制 。 方法：本研究体外分离培养6-8 天BABL/C 小鼠睾丸的SSCs，进行形态学鉴定，并通过含 -5 mol/L 的L-DMEM 培养基对精原干细胞进行体外诱导分化， 10 % FBS、ATRA 浓度为1.0×10 观察mSSCs 加入诱导剂后的形态学变化，用间接免疫荧光技术从c-kit、Oct-4、GCNF 三个 标志物表达情况观察诱导分化情况，通过RT-PCR 检测mSSCs 诱导分化前后（0h,2h,72h ） Stra8、mina53 、Oct-4、GCNF 的mRNA 的水平，初步了解 Stra8、mina53 、Oct-4、GCNF 的表达状况，以及与mSSCs 体外分化的相关情况。 结果：1、形态学变化显示ATRA 使mSSCs 向精母细胞方向发生了分化，并通过间接免疫荧 光反应进行鉴定；2 、Stra8 在mSSCs 诱导分化2 h 、12 h、72 h 的水平高于成年小鼠和未诱 导分化的水平，其中12 h 的表达水平最高，72 h 时水平低于2 h ，各对照组间差异具有统计 学显著性；mina53 的表达在诱导后增加，其水平高于成年小鼠和未诱导mSSCs 的水平，但 差异不具统计学显著性。3、Oct-4 在mSSCs 诱导前呈表达水平最高，诱导2h 、12h 后下降， 72 小时降至最低。4 、GCNF 的表达在诱导12h 后表达开始增强，但是 12h、72h 的表达水 平远低于成年小鼠组。 结论：（1） 首次用ATRA 在体外使mSSCs 向精母细胞方向发生分化（2 ）首次在ATRA 诱 导mSSCs 体外分化中研究Stra8、mina53zuo 表达的相关性及其作用。（3 ）Stra8 基因呈高表 达，但mina53 基因呈高表达不确定，两者之间不能确定该过程中的负相关性。（4 ）mina53 在ATRA 诱导mSSCs 体外分化过程中与细胞增殖和分化的关系不能确定。（5 ）在ATRA 诱 导mSSCs 体外分化过程中，GCNF 和Oct-4 的表达呈负相关。 关键词：精原干细胞，Stra8,mina53, GCNF;Oct-4；全反式视黄酸，分化，增殖 论文类型：A （基础研究） I Abstract Objective: To study the expression of Stra8 、mina53 、Oct-4 and GCNF in orientation-induced differentiation in mSSCs in vitro ，which wouid be useful for learning the optimal condition of culturing mSSCs and the biological characteristics of mSSCs and recognizing the genetic mechanisim of the differentiation in mSSCs . Methods: 1、Separated and cultured spermatogonial stem cells of testis of mice aged 6-8 days in vitro. Induced mSSCs differentiate into spermatocyte orientation in vitro by ATRA. 2 、Markers(c-kit 、Oct-4、