猪γ-干扰素基在毕赤酵母中的表达与活性检测.pdf

猪Y一干扰素基因在毕赤酵母中的 表达与活性检测 预防兽医学专业硕士研究生 李路宁 指导教师 彭远义教授 摘 要 猪干扰素-7(PoIFN．ff)是由激活的T细胞和NK细胞产生的一类细胞因子，它具有高效的抗 病毒感染、抑制胂瘤细胞生长和调节机体免疫功能的作用。作为生物药剂和疫苗佐剂具有广 阔的应用前景。 为了更好地利用基因工程技术来开发重组猪干扰素吖制剂，本研究将去除信号肽的猪干 扰素吖基因置于毕赤酵母a因子分泌信号的DNA序列后，构建成能分泌表达PolFN-7蛋白的 重组表达载体pPIC9K-PolFN-7，然后将其导入高效表达系统一毕赤酵母中。培养毕赤酵母， 表达PoIFN-7蛋白，测定其效价，为PolFN-y进一步的研究与开发打下基础。本研究的主要结 果如下： 收并用连接试剂盒酶连接目的片段。转化大肠杆菌，质粒抽提、酶切及PCR鉴定。结果表明， 段定向插入到表达载体启动子下并形成芷确的开放阅读框(ORF)。 板和G418抗性筛选，得到重组转化子53个。用特异性引物，在提取质粒之后，对转化菌株 进行PC