猪toll样受9基因胞外区的克隆及其原核表达.pdf

tr舭撒嘶黼剃文 Y．937217 猪ToH样受体9基因胞外区的克隆及其原核表达 摘要 当病原体入侵时，天然免疫是多细胞生物抵御病原体入侵，迅速控制感染的第一道 防线。在脊椎动物，参与这种早期免疫反应的各种细胞和分子对其获得性免疫的形成具 有决定性作用。研究发现，哺乳动物Toll受体家族属于细胞因子受体或模式识别受体， 能够激活类似但不完全相同的信号转导途径，从而发挥天然免疫和获得性免疫调节作用， 以抵御外来微生物或寄生虫的感染。 本研究以植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPs)共同刺激从猪脾脏和淋巴结分离的 淋巴细胞，提取总RNA，利用RT—PcR技术，在国内首次以分段克隆法，克隆出猪TLR9 基因胞外区、胞内区序列，片段大小分别为1820bp、1700bp。通过序列分析所克隆的猪 TLR9基因胞外区、胞内区的核苷酸序列和氨基酸序列与GeIlBalll(上的登载的序列的同源 性分别为98％和100％。然后，将具有识别抗原物质功能与pGEx一4T-1连接后转化太肠杆 析，结果表明，表达的重组蛋白分子量约为67KD，表达量占菌体总蛋白的20％左右，说 明已成功表达了胞外区分子片段，这为TLR9基因编码蛋白结构与功能的进一