猪传染性胸膜肺放线杆菌的分离鉴定及其apxⅳa基因的pcr检测.pdf

摘要 本研究采用以牛脑心浸液为基础的液体培养基和巧克力平板接种方法，从某 猪场典型传染性胸膜肺炎症状猪的肺脏和扁桃体中分离到1株具有多形性的革兰 氏阴性球杆菌。培养特性、生物学特性和生化鉴定结果表明，该分离菌为猪胸膜 肺炎放线杆菌(APP)。采用琼脂扩散试验(GDT)方法，血清型鉴定为1型。 致病性试验表明，分离菌对小白鼠有强致病力，LD。测定为7．2×l旷CFu。滴 度困难；剖检的特征性病变为肺脏萎缩，并与横隔膜粘连；心包膜与胸膜和横隔 膜粘连，并与肺脏有不同程度的粘连。对试验猪进行胸膜肺炎放线杆菌分离发现， 接种后60h在两头猪血液中分离到APP，72h在5头猪的血液中分离到APP，粪便里 不能分离到病原。 根据GenBank上公布的猪胸膜肺炎放线杆菌的APXIVA基因序列，设计一对引 物，筛选最佳反应参数，建立了猪传染性胸膜肺炎的PCR诊断方法。以胸膜肺炎 放线杆菌血清l型、3型和7型标准菌株、本研究所分离的APP，实验室保存的沙门 氏菌、葡萄球菌、链球菌、巴氏杆菌标准株提取的I)NA为模板进行PCR检测。结果 表明，APP标准株、分离菌株均检测到APxⅣA基因，扩增出的特异片段大小约 400bp，而其它对照菌均未检出。 提取试验猪血、粪和组织中的DNA，