猪内源性反转录毒感染人源细胞全基因克隆与序列分析.pdf

猪内源性反转录{芮毒感染人源细胞全基因克隆与序列分析 摘要 猪内源-|生反转录病毒感染人源细胞全基因克隆与序列分析 中文摘要 猪内源性反转录病毒(porcineendogenous 病毒，以前病毒的形式整合在宿主基因组中。由于猪的心血管、消化、皮肤等系 统与人类具有较大的相似性，一直是人类异种器官移植的首选供体。事实上，医 生旱已在使用猪的不同成分如心脏瓣膜、凝结因子、胰岛细胞治疗人类疾病。尽 管据调查接受活猪组织的人体细胞未发现活性PERV感染的证据，但自从1997年 安全性问题引起了人们广泛关注。 基因进行克隆和序列分析，为进一步构建PERV感染性eDNA克隆，深入研究PERV 对人源细胞的感染、整合、与调控机制奠定基础。依据猪内源性反转录病毒(PERV) 5．0软件设计合成了覆盖全长的5对重叠引物。 WZS株全基因组序列，利用primer 其中5’端上游引物P．F中，在5’末端引入了病毒基因组中没有的Sad酶切位点和 T7启动子核心序列，以便用T7RNA聚合酶进行体外转录。在5’末端还引入一个 与病毒5’末端直接相连的外源G，提高转录效率，方便体外