猪囊尾蚴t24因的克隆、表达与免疫原性分析.pdf

摘 要 扩增出716bp的片段，扩增产物连接到pGEM．T 98％和100％。 I和SalI酶切， 将重组质粒pGEM—T24和原核表达载体pGEX．4T_1分别用EcoR 与GST形成融合形式，分子量大小为40ku左右，能被猪囊尾蚴阳性血清所识别；将表 组融合蛋白产物发生免疫学反应。 I和Not I酶切，亚克 将重组质粒pGEM．T24和真核表达载体pPIC9K分别用EcoR pPIC9K—T24。用Sal 采用G418浓度梯度法对所有在营养缺陷型选择培养基MD上生长出的转化子进行筛 选，获得的高拷贝重组菌株。用PCR检测表明有目的基因整合。用1％甲醇诱导表达重 毕赤酵母中成功表达，表达产物的分子量为21ku左右，能被人囊虫阳性血清所识别。 本研究克隆了猪囊尾蚴T24基因，分别在原核和真核表达系统中进行了表达，证实 其表达产物具有免疫原性，从而为研制猪囊尾蚴基因工程疫苗提供