猪圆环病毒ⅱ型克隆抗体的制备及抗原捕获elisa方法的初步建立.pdf

摘要 系统衰竭综合症(P删s)，给世界养猪业造成相当大的经济损失。 xYT培养基中进行诱导表达，收集 的重组菌pGEx—Pcv，”。与pGEx—PCV“w在含氨苄青霉素的2 菌液，超声波裂解。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)，切下含目的蛋白的胶条，免疫BALB／c 小鼠来制备单克隆抗体，经闯接免疫荧光抗体试验(IFA)来筛选阳性克隆，再采用有限稀释法 进行亚克隆，最终得到20株阳性单克隆。采用抗体亚类鉴定试剂盒对单抗的重链和轻链进行鉴 定，确定了单抗的部分生物学特性，经】FA与westernB10tting检测，所得到的20株单抗中有 共反应单抗。将阳性单克隆扩大培养后注射12周龄经产健康雌性BALB／c小鼠来采取腹水，经 实验结果表明所筛选得到的20株阳性单克隆细胞抗体分泌稳定，所建立的抗原捕获ELISA 方法采用单抗包被，多抗夹心，能够很好的将PCV2、PCVl与猪细小病毒(PPv)、伪狂犬病毒(PRv)、 猪繁殖呼吸障碍综合征病毒(PRRsV)、猪流感病毒(SI)等病毒分开，为今后建立Pcv2诊断试 剂盒打下基础。 关键词；猪圆环病毒Ⅱ型，单抗，双抗体夹心ELlsA，lFA