猪流行性腹泻病重组m蛋白的原核表达、纯化及鉴定.pdfVIP

摘要 摘要 M蛋白是猪流行性腹泻病毒(PEDV)的主要的结构蛋白，与Genbank上的其它毒株相 比较发现M基因具有很高的保守性，所以重组M蛋白可作为理想的检测抗原用于临床PEDV 感染的检测。本实验为使M蛋白在原核细胞中得以表达，对M基因设计了几个大小不同的 片断，同时采用不同的载体系统，探索了M基因的表达效果，即将猪流行性腹泻病毒的M 基因及编码M蛋白膜外区M基因片断(M’)分别亚克隆到原核表达载体pJLA605和 转化大肠杆菌后，探索了M蛋白在N端和C端不带有谷胱苷肽巯基转移酶(GST)、N端和C pGEX-6p-M’获得了高效表达，其表达产物分别以融合蛋白GST-M和GST-M’形式存在， 涵体提取及凝胶过滤层析纯化，得到纯度达90％以上的重组蛋白。分别用抗c、，777株PEDv M蛋白的单克隆抗体和纯化PEDV病毒粒子对重组M’蛋白及由其制备的多克隆抗血清进行 原性，因此重组M’蛋白与天然PEDVM蛋白有相同的生物学活性。 总之，本实验报道了PEDV中国地方流行毒株LJB／03重组M蛋白的表达，同时采用不 同的载体系统，探索了M基因表达效果，获得了完整M蛋白和M蛋白的膜外区，并对重组 M’蛋白进行了初步纯化与鉴