猪细小病毒ns与vp2基因的研究.pdfVIP

摘要 本研究在PKl5细胞上增殖猪细小病毒7909株，将收获的细胞毒接种初妊母兔， 母兔产出死胎。利用常规的酚．仿抽提与煮沸两种方法提取了全病毒核酸。 NSI蛋白是PPV的主要非结构蛋白，该蛋白在病毒复制时能持续刺激机体产生 抗体，由于病毒灭活后不表达NSl蛋白，因此，该蛋白可以作为检测灭活疫苗免疫 与病毒感染的特异性诊断抗原。根据文献，设计了一对含两个限制性内切酶的特异性 引物，利用PCR技术扩增猪细小病毒NSI全基因。经0．8％的琼脂糖凝胶电泳检测， 在2．2kb左右出现了特异性条带，与预期结果一致。DNA凝胶回收试剂盒纯化PCR 感受态细胞，得到的转化子经酶切分析，筛选出符合阅读框的阳性重组子，构建重组 表达的融合蛋白分子量约为90．0KD，且以包涵体的形式存在。自制高免血清，对目 白与兔抗PPV阳性血清反应，提示重组表达的目的蛋白为PPV抗原成分，即NSl基 因表达产物，同时也表明重组NSI蛋白具有抗原性。 结构蛋白VP2是PPV的主要免疫原性抗原，是抗原决定簇的主体，由VP2构建 的真核表达载体有望研制成为新型的核酸疫茁。本研究利用PCR技术扩增出VP2全 基因，经0．8％的琼脂糖凝胶电泳检测，在1．8kb左右出现了特异性条带，与预期结 所构建的重组质粒未检测出中和抗体。表明VP2基因可以做为研制核酸疫苗的候选 保