致肾盂肾炎大肠菌132菌株消减文库的构建及筛选.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 目的： 组DNA消减文库，筛选其特异性片段，并对新发现的片段获取其完整的开放读 frame，ORF)． 码框(openreading 方法： t．以UPECl32为t伪t盯(待富集特有序列的菌株)，以完成基因组测序的非致 K-12 病性E．coli subtraetive 制消减杂交(suppression 减杂交和两次抑制性PCR，选取UPECl32基因组的差异片段，进行T-A克 隆，转化给E．coli 取白色阳性重组子，获得UPECl32基因组DNA消减文库。 2．从上述DNA消减文库中随机挑选阳性重组子，经碱裂解法提取质粒DNA 作为模板，经PCR筛选验证．将上述PCR产物变性后点于尼龙膜上，地高 K-12 辛随机引物法分别标记UPECl32和E．coliMGl655基因组DNA作为 探针，经过预杂交、杂交、DAB显色，筛选带有UPECl32特异性片段的阳 性克隆子。挑