未成熟鼠反复惊发作后海马内γ-氨基丁酸a受体亚单位α1和γ2变化及其神经行为学影响.pdf

未成熟鼠反复惊厥发作后海马内γ-氨基丁酸A 受体亚单位α1 和γ2 变化及其神经行为学影响 中文摘要 未成熟鼠反复惊厥发作后海马内γ-氨基丁酸A 受体 亚单位α1 和γ2 变化及其神经行为学影响 中文摘要 目的：探讨未成熟大鼠反复惊厥(Recurrent seizures，RS)发作后GABAA 受体亚单 位α1 和γ2 表达及其远期脑损伤的影响，以了解该γ-氨基丁酸A 受体（GABAA 受体） 亚单位在未成熟脑癫痫发作中的作用。 方法：第一部分：通过三氟乙醚诱导方法，建立新生期大鼠反复惊厥动物模型， 并观察其神经行为学改变；第二部分：随机选取Waster 大鼠72 只，分为两组：正常 对照组（CONT 组，36 只）、反复惊厥组（RS 组，36 只）。新生期反复惊厥动物模 型为每日反复吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5 次，每次间隔2h，连续5d；正常对照组 同样操作但不吸入三氟乙醚。分别于生后不同时间通过平面翻正、前肢悬挂、悬崖回 避、负趋地性、旷场实验、平衡木实验、Morris 水迷宫实验等评价其神经行为情况； 并分别于末次惊厥后1d 及25d 、60d 取大脑海马组织，每个时间点12 只，采用免疫 印迹技术(Western blot)及荧光定量RT-PCR 法测定海马GABAA 受体亚单位α1 和γ2 的表达。 结果：1、行为学结果：（1）悬崖回避：RS 组大鼠从边缘退回或转身所需时间 较CONT 组明显延长(P0.05) ；（2 ）负趋地性：RS 组大鼠倒转180℃所需时间较CONT 组明显延长(P0.05) 。（3 ）旷场试验表明，中央格停留时间RS 组较CONT 明显组延 长(P0.05) ；跨越格数RS 组较CONT 组显著减少(P0.01) 。 （4 ）平衡木试验表明， RS 组大鼠平均评分明显低于CONT 组（P0.05 ）。（5 ）Morris 水迷宫检测检测结果： ①登台潜伏期：经过5 天定位航行试验，两组大鼠的逃避潜伏期呈逐渐缩短趋势。试 验第3d、4d ，RS 组寻找平台时间明显短于CONT 组(P0.05)；第5d 时RS 组寻找平 台时间显著短于CONT 组(P0.01) 。②搜寻策略：CONT 组大鼠多采用直线和趋向式 策略，而 RS 组大鼠则多以边缘式和随机式为主。③穿越平台次数：RS 组大鼠 60s 内穿越平台次数较CONT 组明显减少(P0.05) 。 I 中文摘要 未成熟鼠反复惊厥发作后海马内γ-氨基丁酸A 受体亚单位α1 和γ2 变化及其神经行为学影响 2、Western blot 检测结果：随着大鼠日龄的增长，海马内α1 和γ2 亚单位蛋白表 达水平逐渐增高。末次惊厥后1d （即10 日龄），惊厥组大鼠GABAA 受体α1 亚单位 蛋白表达水平与对照组相比无显著性差异（P0.05 ），GABAA 受体γ2 亚单位蛋白表 达水平较对照组明显降低（P0.01 ）；末次惊厥后25d（即35 日龄），惊厥组大鼠GABAA 受体 α1 和γ2 亚单位蛋白表达水平较对照组均明显降低（P0.05 ）；末次惊厥后60d （即70 日龄），惊厥组大鼠GABAA 受体α1 和γ2 亚单位蛋白表达水平较对照组均明 显降低（P0.05 ）。 3、RT-PCR 检测结果：随着大鼠日龄的增长，海马内α1 和γ2 亚单位mRNA 表 达水平逐渐增高。末次惊厥后1d （即10 日龄）：惊厥组大鼠GABAA 受体α1 亚单位 mRNA 在海马的表达水平较对照组明显降低(P0.01)，γ2 亚单位mRNA 在海马的表 达与对照组相比无显著性差异（P0.05 ）；末次惊厥25 天（即35 日龄）：惊厥组大鼠 GABAA 受体α1 和γ2 亚单位mRNA 在海马的表达水平较对照组明显降低(P0.05) ； 末次惊厥60 天（即70 日龄）：惊厥组大鼠GABAA 受体α1 亚单位mRNA 在海马的 表达水平较对照组明显降低(P0.05)，γ2 亚单位 mRNA 在海马的表达水平较对照组 明显降低(P0.01) 。 结论：(1) 化学致痉剂三氟乙醚可以诱导Waster 大鼠反复惊厥，新生期大鼠反复 惊厥发作会对大鼠产生一定程度的脑损害，致使大鼠生长发育落后，神经反射延迟， 并产生成年期新环境适应能力下降，以及远期学习、记忆能力