腺相关病毒载体导人β-ngf和pdgf-b基因联合转染猫角膜内皮细胞的实验研究.pdf

内皮细胞的实验研究 中文摘要 目的：通过腺相关病毒(AAV)载体介导人B一神经生长因子(B-NGF)基因和人 血小板源性生长因子基因B(PDGF．B)联合转染体外培养的猫角膜内皮细胞，探 讨其对该细胞生物学效应的影响。 方法：体外培养的猫角膜内皮细胞，通过细胞形态学观察、神经特异烯醇化酶 (NSE)单克隆抗体免疫荧光染色鉴定细胞的种类及纯度。构建从V载体，利用 从V载体介导绿色荧光蛋白(GFP)基因转染猫角膜内皮细胞，根据其阳性表达率 测定转染效率。从V—B-NGF和AAV—PDGF—B分别和联合转染猫角膜内皮细胞后， Real-Time PCR及Western 角膜内皮细胞72小时后，通过m检测细胞增殖能力的改变，流式细胞仪测定 处于G1期的细胞比例，检测外源基因对细胞周期的影响。划痕实验观察从v—B -NGF和从V—PDGF-B对细胞迁移能力的影响。’ 结果：猫角膜内皮细胞体外培养可形成完整的细胞单层，经形态学观察、NSE免 疫荧光染色证明为纯净的猫角膜内皮细胞。AAV介导的绿色荧光蛋白基因转染猫 角膜内皮细胞72h后，荧光显微镜下观察可见细胞内清晰的绿色荧光，测得转染 效率可达67．81％。从V—B-NGF和从V—P