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1、胡桂兵，林顺权，叶自行，徐昌杰，张上隆杧果LEAFY 同源基因的分离及序列分析. 亚热带植物科学，2004,33(2):1-4 在比较其它物种上已克隆的LEAFY 基因序列的保守区后设计一对长度均为23bp 的特异引物，上游引物：5’-GAAGTGGCGCGTGGGAAAAAGAA-3’；下游引物：5’- CGGAGCTTGGTGGGAACGTACCA-3’。PCR 体系：10×PCR 缓冲液（含Mg2＋）5.0μl，dNTPs（各自2.5mmol/L）4.0μl，上游引物1.0μl，下游引物1.0μl，模板DNA4μl，Ex Taq（5U/μl）0.5ìl，加灭菌双蒸水至总体积50μl。扩增程序为：94℃变性5min 后，按94℃，50s→55℃，70s→72℃，150s 进行35 个循环，最后72℃延伸10min 结束。 刘月学 , 胡桂兵, 林顺权, 刘宗莉, 陈厚彬. 枇杷L EAFY同源基因的克隆及序列分析华南农业大学学报, Vol. 26 , No. 2 比较其他物种上已克隆的LEAFY (LFY) 序列保守区后设计了1 对长度均为25 bp 上海生工公司合成. 上游引物A: 5′GARGTGGCGCGCGTGGSAARAAGAA-3′; 下游引物: 5′-CAGAGYTTGGTGGGMACRTACCA-3′. 10 ×PCR 缓冲液、DL2000 DNA 分子标准、Taq 酶、dNTP 均购自TaKaRa 公司, 其他试剂均为分析纯试剂. 反应体系为:10 ×PCR 缓冲液(不含Mg2 + ) 510μL ,MgCl2 (25 mmol·L - 1) 410μL ,dNTP 混合物(各25mmol·L - 1) 410μL ,上游引物(10μmol·L - 1) 110μL ,下游引物(10μmol·L - 1 ) 110μL ,模板DNA 110μL , Taq酶(5 U·μL - 1) 015μL ,加灭菌双蒸水至总体积50μL.扩增参数为: 94 ℃变性5 min 后, 按94 ℃, 40 s ;51 ℃,60 s ;7115 ℃,90 s 进行30 个循环. 李建安, 孙　颖, 陈鸿鹏, 刘丽娜, 郭文丹. 油桐L EAF Y 同源基因片段的克隆与分析.中南林业科技大学学报 28( 4): 21-26 应用生物信息学软件V ecto r N T I 9. 0 将多种植物的L F Y 基因组DNA 序列进行比对分析后, 根据保守区设计1 对引物并由上海博尚公司合成, 序列如下. F1: 5′CGGA GTTTGGTGGGMACRTACCA -3′ R1: 5′-CARGGGTGCGCGCGGTGAA GTTA -3′ 反应体系: 10×PCR Buffer (M g2+ F ree) 2. 0 LL; dN TP s (10mmo l?L ) 1. 6 LL;M gCl2 (25mmo l?L ) 1. 2 LL; 引物F1 (10 Lmo l?L ) 0. 8 LL; 引物R1 (10 Lmo l?L ) 0. 8 LL; 模板DNA 0. 5 LL; TaqDNA 聚合酶(5U ?L ) 0. 1 LL; 加超纯水至总体积20. 0 LL. 反应条件: 94 ℃变性3 m in; 94 ℃变性30 s, 61 ℃退火30 s, 72 ℃延伸2 m in, 35 个循环; 72 ℃延伸5 m in; 曾黎辉、王庆莲、洪自同、吴少华. 龙眼LEAFY同源基因片段的克隆和表达. 热带作物学报,27(4):69-73 比较其他物种，如柑橘[15]、葡萄[16]、苹果[17]、西洋梨(GenBank 序列号AB162030)、杧果（ AY189684）等，已报道的LFY/FLO 同源基因序列3′端保守区后，设计了一对简并引物。上游引物序列为：5′- GAGGGAGCACCC(G/A)TTCATTGTGAC- 3′；下游引物序列为：5′- GTACCAGATCGAGAGACGGGGATG- 3′。反应体系为：10×PCR Buffer (Mg2+ Plus)5.0 μL、10 mmol/LdNTPs 4.0 μL、上游引物(10 μmol/L)2.0 μL、下游引物(10 μmol/L)2.0 μL、Taq 酶(5U/ μL) 0.5 μL、cDNA（ 或DNA）2.0 μL，加无菌ddH2O 至总体积50 μL。反应条件是：94 ℃预变性2 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火40 s，72 ℃延伸30 s，30 个循环；72 ℃延伸7 min。PCR 产物电泳照相并直接用于测序。引物由上海博亚/英俊生物技术有限公司合成；测序委托上海博亚/英俊生物技术有限公司和TaKaRa 生物工程(大连)有限公司