影响粒单细胞系l-60细胞功能的血糖水平的探讨.pdfVIP

影响粒单细胞系HL．60细胞功能的血糖水平的探讨 硕士生姓名： 骆琳 指导教师： 苏本利教授 指导小组： 刘纯青讲师 专业名称： 内科学(内分泌与代谢疾病) 摘要 背景与目的：新近研究发现糖尿病患者易患细菌感染、大血管并发症以及微 血管并发症，这些均与中性粒细胞的数量和质量的改变有关。中性粒细胞是机体 抗感染免疫的第一道防线，糖尿病时中性粒细胞的功能明显受损，因此，中性粒 细胞功能肯定受高血糖的影响。血糖控制在预防感染方面至关重要，但旨在研究 究均没有发现实现血糖“正常化”可减少全因死亡。但是，当前尚没有研究探讨糖尿 病时血糖到底控制在何种水平既安全、不影响中性粒细胞功能，又避免中性粒细 胞在杀伤病原微生物的同时不对机体造成损伤。本实验用人类早幼粒细胞性白血 病细胞株(HL．60)细胞作为研究的模型，来研究不同血糖浓度状态下胰岛素浓度 及外源性炎性因子脂多糖对中性粒细胞的吞噬功能和ROS的产生的影响，以找到 适合临床上血糖控制的安全范围。 方法： 1．细胞培养 人类早幼粒细胞性白血病细胞株HL．60(大连医科大学检验医学院实验室提 供)。将HL．60细胞置入含有的10％胎牛血清的RPMI1640(5．0 mmol／L葡萄糖) 培养液中，放置于3712，5％C02的孵育箱中培养。并在对数生长期收获细胞，使 细胞达到同步化后加入不同的实验处理因素。 2．实验分组 1)本实验分别用不同水平的葡萄糖浓度对HL．60细胞进行培养(3．5、5．O、 6．0、7．O、8．0、9．0、10．0、11．O、15．0、20．0 mmol／L、其中设置20．0mmol／L甘露 醇作为渗透压对照组)，细胞于37C，5％C02的孵育箱中培养72h后，收获细胞。 2)实验各组细胞再分别用不同浓度的胰岛素进行对抗(0mlU／L、相当于生 理浓度20 mIU／L、相当于应激浓度50mIU／L、相当于高浓度胰岛素1000mlU几)， 细胞于37℃，5％C02的孵育箱中培养24h后收获细胞。 3)HL．60细胞在160 分化24h后，细胞具有吞噬能力，用于检测吞噬功能。 的条件中，刺激8h后收获细胞，检测HL．60细胞的吞噬的功能和氧化应激ROS 产生的多少情况并进行单因素方差分析和秩和检验，结果进行比较。 结果： 1．葡萄糖、LPS及胰岛素对HL-60细胞吞噬能力的影响 (1)HL．60细胞吞噬功能从葡萄糖5．0mmol／L起逐渐增强，至8．0mmol／L达 到高峰显著增强(Po．05)，至10．0mmol／L回到基线水平。 (2)培养液中存在10 萄糖浓度为3．5mmol／L时最强，与5．0mmol／L葡萄糖时相比差异有统计学意义 (Po．05)，葡萄糖浓度从5．0mmol／L至20．0 mmol／L没有观察到对细胞吞噬功能 的影响。 (3)培养液中加入不同浓度胰岛素后，HL．60细胞的吞噬功能呈下降趋势， 且与胰岛素浓度升高没有明显关系。胰岛素能够抑制葡萄糖引起的HL．60细胞吞 噬功能增强。葡萄糖浓度为5．0-10．0mmol／L时，胰岛素对葡萄糖引起的细胞吞 噬功能抑制最明显(Po．05)，而10．0mmol／L葡萄糖以后细胞吞噬功能减弱的不 明显。 (4)培养液中存在10 gg／ml脂多糖(LPS)时，并在孵育葡萄糖的同时加入 相当于生理浓度的胰岛素(20mlU／L)、相当于应激浓度的胰岛素(50mn班，) 和相当于高胰岛素(1000 m砌几)，与未加入胰岛素时相比，炎症因子存在能够 使HL．60细胞的吞噬功能增强，胰岛素浓度对HL．60细胞的吞噬功能没有明显影 响，但仍旧存在一定程度的抑制作用。 2．葡萄糖、LPS及胰岛素对HL-60细胞产生ROS的影响