应用抑制性差减交技术分离白血病多药耐药相关基因.pdfVIP

应用抑制性差减杂交技术分离白血病多药耐药相关基因 硕士生姓名：潘酷 指导教师：袁宏教授 专业名称：I胳床检验诊断学 摘要 目的：以抑制性差减杂交技术分离、克隆自血病相关的K562和K562／DOX细 胞株之间差异表达相关基因。 subtractive 方法：应用抑制性差减杂交(suppressive 接头连接，再与对照组eDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应。将产物纯化后 Vector载体连接，并转入大肠杆菌中构建eDNA差减文库，随机挑 与pMDl9．T 选单克隆进行PCR扩增验证，挑取阳性克隆提取质粒并进行测序及同源序列分 析，确定分离出的相关差异表达基因。 结果：获得差异eDNA片段，克隆后挑取24个单克隆菌落进行PCR鉴定， 15个有插入片段，筛选出220个差异基因，测序后进行Blast序列比对分析确定 这些片段是差减出的差异基因的片段。发现在220个差异基因中有血红蛋白、核 糖体和线粒体等相关基因。其中热休克