玻璃化冷冻保存大鼠胰岛细胞的影响.pdf

山西医科夫学硕I：学位论文 玻璃化冷冻保存对大鼠胰岛细胞的影响 摘 要 目的：探讨玻璃化冷冻保存对大鼠胰岛细胞的影响以及通过玻璃化冷冻保存的方法建立 胰岛细胞库；且将二甲基亚砜、乙二醇与甲酰胺按照不同比例联合应用，观察其对大鼠胰 岛细胞的影响。选取优化方案及对其可能机制探讨。 方法：将分离纯化的的胰岛细胞制备为悬液，检测其纯度合格(60％)后。将悬液分 为四组：A组为新鲜胰大鼠岛细胞组，作为对照组，观察经冷冻保存复温后的大鼠胰岛细 将胰岛细胞与冷冻保护剂混匀后，直接投入液氮中保存，分别于7d、14d后在37℃快速 复温。经不同浓度蔗糖液、Hanks液分级移出冷冻保护剂后，含10％(v／v)胎牛血清 染色，荧光显微镜下，通过计数染色细胞计算胰岛细胞的活率，间接反应胰岛细胞结构的 完整性。采用ELISA方法检测胰岛素分泌情况，观察胰岛细胞的功能。综合二项指标评价 玻璃化冷冻保存方法。 O．05，按照a=O．05检验水准，认为二组之间不存在统计学差异。C组内不同时间段比较 异。C组与A组比较P0．05，按照a--0．05检验水准，认为二组之间不存在统计学差