第9章 酶促反应动力学.ppt

第九章：酶促反应动力学 主 要 内 容 底物浓度对酶促反应速率的影响 酶的抑制作用 温度对酶促反应的影响 pH对酶促反应的影响 激活剂对酶促反应的影响 9.1 底物浓度对酶促反应速率的影响 酶促反应中,如果[S]大大过量, V与[E]的关系如何？ 实际情况下，[E]稳定，而[S]变化，V与[S]的关系如何？ 9.1.1 中间络合物学说 1903年Henri用蔗糖酶水解蔗糖实验研究底物浓度与反应速率的关系。 1913年，Michaelis and Menten根据中间复合物学说提出米氏方程。 1925年，Briggs and Haldane提出了稳态理论，对米氏方程做出了重要的修正。 9.1.2 米氏方程的推导 9.1.2 米氏方程的推导 9.1.2 米氏方程的推导 9.1.2 米氏方程的推导 9.1.2 米氏方程的推导 9.1.2 米氏方程的推导 9.1.3 Km的意义 9.1.3 Km的意义 9.1.3 Km的意义 9.1.4 Vmax和K3的意义 9.1.4 Vmax和K3的意义 3、生理条件下S Km， Vmax = kcat [E] 代入米氏方程 v = kcat [E] [S] / Km + [S] = kcat [E] [S] / Km 得出：v = kcat / Km[E][S] kcat / Km为[E]和[S]反应形成产物的表观二级速度常数，单位：L/mol s。 kcat / Km大小可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率。 9.1.5 Km和Vmax的求法 Lineweaver-Burk双倒数作图法 Eadie-Hofstee作图法 Hanes-Woolf作图法 Eisenthal Cornish-Bowden 直接线性作图法 9.1.5 Km和Vmax的求法双倒数作图法 9.1.5 Km和Vmax的求法 Eadie-Hofstee作图法 9.1.5 Km和Vmax的求法 Hanes-Woolf作图法 9.1.5 Km和Vmax的求法直接线性作图法 例题 为了确定某酶的催化反应的初速度的底物依赖关系，制备了一系列的l00ml含有不同底物浓度的反应混合物。向每个混合物加入相同量的酶后便开始反应。通过测定每单位时间（分钟）所形成的产物量而获得催化反应的初速度，其结果如下表所示。 ①把表中的数据绘制成图，在给出的酶量下的Vmax是多少? ②根据米氏方程，用Vmax、υ和〔S〕推演出Km的代数表达式。计算每个反应混合物的Km。 Km值取决于底物浓度吗? ③当底物浓度为0.1mol·L－1和l×l0－7mol·L－1时，计算它们的初速度。 ④反应混合物保温2分钟后确定反应的初速度。当初始底物浓度为1×10－2mol·L－1时，计算产物的生成量。在2分钟后底物总量的百分之几被转换? 9.2 酶的抑制作用 酶的失活与抑制的区别 酶抑制程度的表示方法 酶抑制作用的类型 可逆与不可逆抑制作用的鉴别 可逆抑制作用动力学 一些重要的抑制剂 9.2 酶的抑制作用 9.2.1 酶的失活与抑制的区别 凡是使酶蛋白质变性而引起酶活力丧失的作用称为失活作用；由于酶必需基团化学性质的改变，但酶未变性，而引起酶活力的降低或丧失而称为抑制作用。 9.2.2 酶抑制程度的表示方法 相对活力分数 相对活力百分数 抑制分数 抑制百分数 9.2.3 酶抑制作用的类型 不可逆抑制作用（Irreversible inhibition） 抑制剂与酶的必需基团以共价键相结合引起酶活力丧失，不能用透析、超滤等物理方法去除抑制剂的影响。 可逆抑制作用（ Reversible inhibition ） 抑制剂与酶的必需基团以非共价键相结合引起酶活力下降或丧失，能用物理方法去除抑制剂的影响。它分为三种：竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制。 酶的竞争性抑制作用 大部分竞争性抑制剂（competitive inhibitor）与底物结构类似，因此能与酶活性部位结合，与酶形成可逆的EI复合物，但EI不能分解成产物P，酶反应速率下降，它可以通过增加底物浓度而解除。如丙二酸和戊二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。 酶的竞争性抑制作用 酶的竞争性抑制作用 酶的非竞争性抑制作用 酶的非竞争性抑制作用 酶的反竞争性抑制作用 9.2.4 可逆与不可逆抑制的鉴别 9.2.5 -竞争性抑制作用动力学 9.2.5- 竞争性抑制作用动力学 9.2.5- 非竞争性抑制作用动力学 9.2.5- 反竞争性抑制作用动力学 9.2.5- Dixon作图法求Ki 9.2.6 一些重要的酶抑制剂 9.2.6 一些重要的酶抑制剂 9.2.6 一些重要的酶抑制剂 9.2.6 一些重要的酶抑制剂 9.2.6 一些重要的酶抑制剂