应用owls研靶序列二级结构对固液界面nda杂交动力学的影响.pdf

·中文论著摘要· 应用OWLS研究靶序列二级结构对固／液界面DNA 杂交动力学的影响 目 的 基因芯片技术自上世纪80年代初诞生以来，以其高通量、速度快、成本低等 优点，取得了长足的发展。特别是在基因表达谱分析、测序、基因突变检测、SNP 检测、临床疾病诊断等领域已得到了广泛的应用。然而现阶段基因芯片技术存在 的瓶颈问题是基因芯片杂交结果重复性较差，限制了其发展和临床应用。我们利 用OWLS非标记检测技术观测到当靶序列长于探针序列时，由于靶序列及其与探 ．针杂交后的游离端在溶液中会形成立体结构，而具有立体结构的靶序列分子的热 力学扩散运动，不仅影响杂交体的形成，还会使杂交体的解离常数增加，甚至使 杂交体不能稳定存在。靶序列分子结构是影响杂交动力学的重要因素。 OWLS OpticalWaveguideLightmode 变化小于0．1℃ 的恒温外循环杂交体系平台，其外接的微流体控制系统能够不断 地将预先注入样品池的样品补充到杂交反应池内，维持杂交反应池内在杂交过程 中靶序列浓度相对恒定。且OWLS是非标记的检测方法，通过实时检测杂交信号 dM／dT M 等与动力学相关的数据结果并通过屏幕多个窗口一同显示，从而研究人 员可以实时监测杂交动力学的动态过程。 本课题的目的是研究不同类型靶核酸二级结构和靶核酸热力学扩散对固／液 界面核酸杂交动力学过程的影响。研究的意义在于探明不同靶序