牙鲆胚胎的玻璃冷冻保存的研究.pdf

牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存的研究 牙鲆胚胎的玻璃化冷冻保存的研究 摘 要 本以文牙鲆胚胎为材料，研究了麦管直径、平衡温度、装卵个数等影响鱼类 胚胎玻璃化冷冻保存的几个方面的内容。对牙鲆胚胎的玻璃化冷冻保存方法和条 件进行了优化，特别对玻璃化液组成进行了改良，对胚胎发育时期和平衡时间进 行了筛选，对胚胎的冷敏感性和冷冻损伤机理进行了探讨。 结果表明：含有多种抗冻剂的玻璃化液PMDD(2％PVP)，玻璃化稳定，脱玻 璃化率较低，适宜进行玻璃化冷冻。在胚胎发育过程中，牙鲆各期胚胎对玻璃化 液的适应能力不同，尾芽期胚胎较其他时期耐受力强。冻前平衡时间跟牙鲆胚胎 min 的质量有密切的关系，一般情况下，在玻璃化液PMDD(2％PVP)中平衡40 就足以使玻璃化液渗透完全；时间延长，成活率显著降低(p(o．05)。牙鲆胚胎 在O Ficoll可以增强玻璃化液的稳定性，降低脱玻璃化率。牙鲆胚胎具有高的冷敏 感性，温度降到O。C以下，成活率显著降低；这种冷敏感性随胚胎发育阶段而变 化，发育后期的胚胎比发育早期的胚胎显示出了对低温更高的耐受力。在三种规 格的麦管中，直径为2．5IBm的麦管脱玻璃化率最低，适宜进行玻璃化冷冻保存 的研究；在1个直径2．5mm的麦管中装入2—5粒牙鲆胚胎，脱玻璃化率的改变 无显著差异。牙鲆胚胎的冻前平衡过程及洗脱过程的显微观察表明，抗冻剂向胚 胎渗透的最大障碍是卵黄囊；牙鲆胚胎在进行玻璃化冷冻保存时，卵黄囊是极易 受损伤的部位。 根据优化的条件，对牙鲆两个时期的胚胎进行超低温冷冻保存实验，共成活 4次，获得成活胚胎8粒，其中7粒孵化出健康的鱼苗。本文为鱼类胚胎冷冻保 存技术的建立提供基础资料，并证明了牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存的可能性。 关键词：牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存 牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存的研究 of flounder cryopreservationJapanese embryosby vitrifiearlon Abstract Tllisarticlestudiesseveratfactors the of affectingcryopreservationJapanese flounder vitrificationsuchasstraw embryos by diameter、equilibratingtemperature、 numbersinastrawandet a1．．Themethodsandconditionsof embryo flounder are cryopreservationJapanese embryos vitrifcationsolution are seleetsthe componentimproved．Thisstudy embryostage and timeandalso onbeththe tochillandthe equilibrating argue embryosensitivity mechenism damage ofcryopreservation． Resultsareasfollows．Vitrificationsolution many could anditsdevitrificafionrat