胃癌高发人群体胞错配修复功能缺陷的研究.pdfVIP

胃癌高发人群体细胞错配修复功能缺陷的研究 博士研究生：李建华 指导教师：吕 申 教授 专业名称：病理学与病理生理学 摘 要 胃癌是我国发病率最高的恶性肿瘤之一，临床流行病学调查发现，其发病具 有一定的遗传倾向，并有家族积聚现象，这与欧美人群常见的遗传性非息肉性结 cotorectal 肠癌(hereditarynonpolyposis 目前认为HNPCC的发病与错配修复基因突变引起的细胞错配修复功能缺陷有关。 错配修复基因突变或功能丧失后，其编码蛋白功能丧失，这就使下游的癌基因和 抑癌基因等多种基因的突变因得不到修复而逐渐积累，细胞发生恶变的危险性增 高。近年随着饮食习惯的改变，胃癌高发人群的大肠癌发病率有增高趋势。胃癌 和大肠癌都是由消化道上皮发生的恶性肿瘤，而消化道上皮细胞的增殖状态比较 活跃，我们推测错配修复基因的突变或错配修复功能的丧失也可能是胃癌发生的 原因，为此，进行如下研究。 一 胃癌组织错配修复蛋白嘲LHl和hMSH2表达的检测 以56例来自我国东北地区的胃腺癌患者为研究对象，取手术切除的胃癌组织 蛋白表达。 失率与胃癌的分化程度和临床分期关系不明显(p=O．762，p=O．334)。 二 胃癌组织MSI及其与错配修复蛋白表达缺失的关系 取56例胃癌患者的胃癌组织及周围正常组织提取DNA，选取基因组上的五个 500size 扩增产物加入GeneScan standard共同热变性后，用毛细管电泳进行分 析。被检测的五个微卫星位点如出现两个或两个以上位点的不稳定，定为微卫星 ·1。 没有位点出现不稳定定为微卫星稳定(MSS)。 l 失高度相关(穿=28．57 早期胃癌(Z=6．64 三 胃癌易感人群错配修复基因hMLHl和hMSH2点突变的分析 有胃癌家族史的胃癌患者16例及5个家系健康人114例，无胃癌家族史的胃 癌患者56例，正常人群对照100例，采取外周血，用小样本血液DNA提取试剂盒 样本进行测序。 没有检测到突变，hMSH2基因的外显子5和外显子7也没有检测到突变。在有家族 史的胃癌患者的16例外周血标本中，有6例出现突变，突变率37％；无胃癌家族 史的56例患者，总计6例出现突变，突变率11％：胃癌家系健康人群的114例样 本中，31例出现突变，突变率27％：在100例对照样本中，5例出现突变，突变率 变点位于第592位密码子的第二个碱基(GTC—GGC)，这三个突变都是碱基置换。 胃癌患者和胃癌家系健康者的体细胞hMLHl基因出现的突变位点相同，但有家族 PO．01)，无家族史的胃癌患者突变率虽然略高于对照组，但差异不显著 (D=O．204)。第16外显子的突变是目前尚未见报道的新的突变。 四 胃癌错配修复基因hMLHI的启动子甲基化及其与MSI的关系 基化用甲基化敏感的单链构象分析法进行检测：基因组DNA用亚硫酸氢钠处理， 象多念性的分析，电泳出现异常峰，即判定甲基化阳性。 ·2‘ 达的缺失，而无启动子甲基化的胃癌组织和癌旁组织未发现hMLHI蛋白表达的缺 基因启动子甲基化的胃癌标本，7例为高分化，6例为中低分化：5例为早期胃癌， 8例为进展期胃癌，hMLHI启动子甲基化水平与胃癌的分化程度及临床分期无明显 关系(p=O．332p=1．000) 通过对胃癌组织hMLHI和hMSH2蛋白表达的检测和微卫星不稳定性的分析、 启动子的甲基化的检测以及具有胃癌家族史的患者和健康者的外周血hMLHI和 hMSH2基因的检测，可以得出如下结论： 结论 I．部分胃癌可以检钡娅0 蛋白表达缺失和MSI—H具有很好的吻合性。这些胃癌的发生可能与细胞错配修复 功能缺陷有关 2．胃癌的微卫星不稳定性随着肿瘤的演进而增加 3．与HNPCC相似，具有胃癌家族史的人群中存在着较高频率的错配修复基因 的胚系突变 4．胃癌hMLHI宿动子甲基化与散发性胃癌微卫星不稳定性高度相关 5．胃癌发生过程中hMLHI启动子