补体调节蛋白c59在肝脏缺血再灌损伤的作用及机制研究.pdfVIP

补体调节蛋白CD59在肝脏缺血再灌损伤的作用及机制研究 研究背景 肝移植是终末期肝病唯一有效的救治方法。随着手术技术的改进和免疫抑制 剂的发展，肝脏移植患者术后长期生存率得到了很大提高，但15-30％的受体移植 物失功仍是影响生存的主要原因。其致病机理是多因素的，其中移植物缺血再灌 注损伤被认为是导致移植物无功能或早期功能不良主要的因素之一，并与器官移 植近期或远期的并发症密切相关。对于肝脏移植而言，供肝和受体机体均存在缺 血再灌过程，这种双重影响更使缺血再灌注损伤成为影响肝移植成功最为重要的 因素。 近年来缺血再灌注损伤的分子机制已取得了较大进展，目前认为缺血再灌注 损伤由多种病理生理学机制引起，主要包括细胞损伤机制、前炎性因子和抗炎性 介质的生成、黏附分子的表达和炎症反应的氧化压力，以及过氧亚硝基底物所致 微血管功能紊乱等。对移植而言，损伤不仅针对移植物自身，对其他组织器官乃 至全身均可造成不利影响。 近来研究表明，缺血再灌损伤与经典和选择途径补体活化级链反应有关。且 不同器官I／R时补体的激活可能途径不同，I／R时补体的激活途径呈器官依赖性。 补体活化产物C3a和C5a等是再灌过程中主要促炎性因子，诱导中心粒细胞聚 集、平滑肌细胞收缩、增加血管通透性以及活化肝脏内巨噬细胞等。此外，补 体裂解产物还可通过刺激巨噬细胞和肥大细胞释放TNF和IL-I活化内皮细胞， 并由此导致纤维蛋白沉积，血小板聚集和中心粒细胞黏附。而这些补体相关的病 理生理变化很可能影响再灌注时期肝脏微循环血流量。微血管灌注不良被认为是 影响缺血后肝功能的主要因素，并被认为是导致移植物失功的重要原因。因此， 阻断补体级链反应，清除补体减少裂解产物的途径可能为有效预防和减轻移植过 程中不可避免的缺血再灌肝脏损伤，保持移植物功能长期稳定，延长移植物的存 3 活时间，改善受体生活质量提供新的思路。 第一部分CD59基因敲除小鼠模型的建立 【摘要】目的建立mCd59ab十双基因敲除小鼠模型及mCd59ab√‘／C3√。基因 敲除小鼠。方法通过基因重组的办法进行胚胎干细胞基因修饰，将“修饰后 的胚胎干细胞植入在B6遗传背景小鼠早期胚胎，生成mCd59a和mCd59b双基因 敲除嵌合体小鼠。结果建立了较稳定的基因敲除小鼠，PCR基因分型证实相关 基因的缺失，流式细胞确认基因功能的缺失并发现小鼠存在补体介导溶血性贫血 特征。结论mCd59ab√一基因敲除小鼠模型是较为稳定的研究CD59功能的动物模 型。 【关键词】补体，CD59，小鼠 Establishmentof for themCd59ab‘|‘Mice Studies Complement amCd59aandmCd59bdouble—knockout [Abstract]ObjectiveDevelop we tousein ontheroleof in mouse细Cd59ab-／-)thatplan studies complement humandiseases．MethodsUndertooka deletion to a targeted strategygenerate mCd59aandmCd59bdoubleknockout successful mouse，Results 1)the generation mCd59aandmCd59bdoubleknockout characterizationof of