视网膜母细胞瘤胞叶酸受体表达水平的研究.pdfVIP

温州医学院硕士学位论文 视网膜母细胞瘤细胞叶酸受体表达水平的研究 中文摘要 目的：本文以视网膜母细胞瘤(RB)细胞株为主要研究对象，采用ELISA试剂 盒法检测叶酸受体(FR)在视网膜母细胞瘤细胞的表达情况，并通过研究实验 组与对照组细胞叶酸受体表达情况的差异，来探讨叶酸受体作为视网膜母细胞瘤 靶向治疗中的一个新靶点所具有的临床意义，为展开视网膜母细胞瘤的靶向治疗 提供实验依据。 方法：本研究以视网膜母细胞瘤细胞株WREI．Rb．1及子宫颈癌细胞株Hela作为 研究对象，其中，WREI．Rb．1细胞株设为实验组，Hela细胞株设为阳性对照组。 (1)从液氮中取出冷冻保存的上述两组细胞株，对两组细胞株进行复苏及培 养，WREI．Rb-1细胞株培养基为：RPMI1640培养基，含10％胎牛血清(FBS)； Hela细胞株培养基为：DMEM高糖培养基，含10％FBS。上述两组细胞株均置 于细胞培养箱中培养，培养条件为37C，5％C02。每两日换液一次继续培养， 密切观察细胞生长状态及增生情况，在观察到细胞增生基本进入平台期时进行 l：5稀释传代培养。一 株的增生基本进入平台期时，将两种细胞株各取l培养瓶冻存至液氮中，再将剩 下的各4培养瓶细胞株分别进行裂解、离心，取上清液过滤，所得滤液产物保存 至．20℃的冰箱中，检测其细胞总蛋白浓度和叶酸受体浓度。 (3)采用BCA蛋白浓度测定试剂盒法分别检测8种浓度的蛋白标准品和 以上2种细胞株样品的吸光度值(OD值)，根据各标准品的蛋白浓度及其对应 的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值，在回归方程 上计算出对应样品的蛋白浓度，所测得样品的蛋白浓度乘以稀释倍数即最终总蛋 白的浓度。 度的叶酸受体标准品和以上2种细胞株样品叶酸受体的表达情况，根据各标准品 的叶酸受体浓度及其对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样 品的OD值，在回归方程上计算出对应样品的叶酸受体浓度，所测得样品的叶酸 受体浓度乘以稀释倍数即最终叶酸受体浓度，该浓度值与对应的样品的总蛋白浓 度的比值即为最终所需的实验数据。 1 (5)应用SPSS5．0软件及MicrosoftExcel软件对实验数据进行统计分析 和图表处理。由于实验数据为非正态分布，故采用秩和检验将WREI．Rb．1细胞 3 温州医学院硕士学位论文 组和Hela细胞组进行比较分析。 结果：通过对REI．Rb-1细胞组和Hela细胞组间实验数据进行秩和检验分析，可 差异，提示WREI．Rb-I细胞叶酸受体的表达水平为过度表达。 结论：视网膜母细胞瘤细胞株WREI．Rb-1叶酸受体的表达水平为过度表达。叶 酸受体可被作为视网膜母细胞瘤的标志蛋白，研究者们可以设计针对叶酸受体的 叶酸偶联抗视网膜母细胞瘤药物来实现视网膜母细胞瘤的靶向治疗，故本实验为 下一步寻求以叶酸受体为靶点进行视网膜母细胞瘤的靶向治疗开展了基础研究 并提供了实验依据。 关键词：叶酸受体，视网膜母细胞瘤细胞，Hda细胞株，ELISA试剂盒法 4 温州医学院硕士学位论文 Detectionofthe LevelofFolate in Expression Receptor RetinoblastomaCells Abstract wereselectedasthemainresearch obiective：Theretinoblastoma(1m)cells subject todetectthe levelofthefolate RB cells ELISA． exp