胰岛素抵抗大鼠骼肌细胞蛋白激酶b的表达及罗格列酮的干预研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………“l 英文论著摘要……………………………………………………………………”3 二、英文缩略语………………………………………………………………………”6 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………“17刖舌…………………………………………………………………………………………………………“ 材料与方法………………………………………………………………………10 结果…………………………………………………………………………………………………………13 讨论…………………………………………………………………………………………………………17 结论…………………………………………………………………………………………………………20 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………21 五、参考文献…………………………………………………………………………22 六、附录 综j苤…………………………………………………………………………………………………………23 在学期间科研成绩………………………………………………………………·35 -致谢………………………………………………………………………………36 个人简介…………………………………………………………………………37 病人都存在胰岛素抵抗 IR ，甚至在正常的生理情况下，也会发生瓜，如妊娠 等。许多研究显示骨骼肌的胰岛素抵抗是和2型糖尿病相联系的重要缺陷之一。 胰岛素通过与胰岛素受体结合而发挥其生理效应，受体后异常即胰岛素信号转导 kinase B，PKB 是由 的异常是导致胰岛素抵抗的重要原因。蛋白激酶B protein 胰岛素调节的若干受体后信号转导因子之一，是胰岛素作用主要的信号转导途径 3-kinase，P13K 途径下游重要的丝 之一磷脂酰肌醇3．激酶 phosphatidylinositol 氨酸／苏氨酸激酶，PKB能通过影响胰岛素的信号转导调节葡萄糖的摄取，糖原合 成，糖酵解等胰岛素代谢反应【l】。罗格列酮作为胰岛素增敏剂可以减轻IR，增加 葡萄糖的摄入，但发挥作用的具体步骤不是十分清楚。LY294002是一种常用的 P13K途径抑制剂，可以通透细胞，特异性抑制P13K，抑制P13K／PKB信号途径。 本研究应用棕榈酸诱导原代培养SD大鼠的四肢骨骼肌细胞形成胰岛素抵抗模型， 检测该模型大鼠骨骼肌细胞在罗格列酮和LY294002分别作用后的胰岛素诱导下 的PKB的蛋白表达及磷酸化情况，探讨罗格列酮是否通过该通路改善胰岛素敏感 性。 材料与方法 在本项研究中，我们用胶原酶与胰酶双重消化的方法原代培养SD大鼠的胎 鼠的骨髂肌细胞，运用差速贴壁法提纯细胞，采用形态分析及免疫荧光技术对细 胞进行双重鉴定。然后用不同浓度的棕榈酸作用于该细胞，诱导后，用葡萄糖检 测试剂盒 葡萄糖氧化酶法 测定培养液中葡萄糖的含量，分析后得到稳定的胰 岛素抵抗模型。设立正常细胞组 NG ，胰岛素抵抗细胞组 IR ，罗格列酮干预组 l、体外培养10天的成肌细胞由单核的长梭形细胞逐渐融合为多核的管状肌 管，同向性排列生长，甚至出现可收缩的肌纤维；免疫荧光技术鉴定细胞， a-Sarcomeric Actin特异性抗体染色结果显示约96％的细胞胞浆呈阳性反应，细胞 核外周及胞浆呈红色荧光，表明培养的细胞为骨骼肌细胞。 2、0．6mM棕榈酸作用于正常培养条件下原代培养的大鼠骨骼肌细胞12．24h， 能显著抑制骨骼肌细胞胰岛素刺激状态下的葡萄糖转运，表明此模型已经对生理 剂量的胰岛素产生耐受，且这种抑制作用呈剂量．时间依赖。 显著性意义。但是RO组PKB473位丝氨酸磷酸化水平较取组明显升高 P O．05 ， RL组PKB473位丝氨酸磷酸化水平较RO组明显降低 P． 0．05 。 当日结 论J’匕 l、用胶原酶与胰酶双重消化，差速贴壁法提纯可以得到状态良好并且纯度较 高的原代培养骨骼肌细胞。 2、0．6mM棕榈酸作用于正常培养条件下原代培养的大鼠骨骼肌细胞12．24h， 可以形成稳定的胰岛素抵抗骨骼肌细胞模型。 3、棕榈酸诱导的胰岛素抵抗骨骼肌细胞模型中，存在PKB的激活作用受损。 罗格列酮增加胰岛素抵抗骨骼肌细胞敏感性的作用有PKB的参与，并且是通过上 调骨骼肌细胞胰岛素信号转导系统P13K途径中PKB473位丝氨酸磷酸化水平来 介导的。 关键词 骨骼肌细胞；胰岛素抵抗模型；蛋白激酶B；棕榈酸；罗格列酮；LY294002。 2 ·英文论著摘要· the PKBin on of RatMode