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胰岛素抵抗大鼠骨骼肌线粒体的功能研究 硕士研究生： 马 靖 指导教师： 杜建玲教授 指导小组： 郭立新教授 专业名称： 内科学 摘 要 目的：研究胰岛素抵抗 insulin 的功能。在高胰岛素．正葡萄糖钳夹实验评价胰岛素敏感性的基础上提取 骨骼肌线粒体，进行呼吸功能测定和脂肪酸p．氧化状态测定，以此来评 价骨骼肌线粒体功能失常与IR是否存在密切关系。 方法： l diabetes 1．建立IR、l型糖尿病 type 2 diabetes 病 type normal 分为NC组l0只、IR组10只、T1DM组15只、T2DM组15只。其中 NC组和T1 DM组大鼠予普通饲料喂养，IR组和T2DM组大鼠饲以高糖 高脂饲料。喂养8周后对TI DM组大鼠腹腔注射60mg／kg的链脲佐菌素， NC组大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液；对T2DM组大鼠腹腔注射 30mg／kg的链脲佐菌素建立模型，IR组大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸缓 冲液。 2．模型建立成功后对4组大鼠行高胰岛素．正葡萄糖钳夹实验，以 infusion 钳夹过程中60分钟至120分钟的平均葡萄糖输注率 glucose rate，GIR 来反映各组大鼠胰岛素的敏感性。 3．取大鼠比目鱼肌约lg，进行线粒体的分离、纯化，所有操作严 格在4℃状态下进行。采用Clark氧电极法对所提取的新鲜线粒体进行呼 吸功能测定，测得线粒体Ⅲ态呼吸速率与Ⅳ态呼吸速率，二者之比即为 control 线粒体呼吸控制率 respiratoryrate，RCR 。 4．测定线粒体脂肪酸B．氧化状态，一方面通过蛋白质免疫印迹法 western blot 检测线粒体肉碱脂酰转移酶．I earnitinepalmitoyl 法测定CPT-I酶活性。 结果： blood 空腹血糖 fasting 5，T2DM组1 IR组4．49士0．71，TIDM组20．904-5．1 3．36士4．56，其中T1DM 0．05 。 Tl DM组，T2DM组的GIR明显低于NC组和T1DM组。 O．05 。 4．Western blot方法检测骨骼肌线粒体的CPT-I蛋白表达，经软件 扫描定量各蛋白条带的相对灰度比值分别为NC组0．434-0．19，IR组 酶活性无明显差异 P O．05 。 结论： 1． IR状态下骨骼肌线粒体呼吸功能受损，CPT-I蛋白表达降低， 骨骼肌线粒体功能失常与IR存在密切关系。 2．高糖状态下骨骼肌线粒体呼吸功能以及脂肪酸B．氧化状态未见 明显异常。 关键词：2型糖尿病 胰岛素抵抗 骨骼肌 线粒体 呼吸控制率 2 in of functioninsulin muscularmitochondrial Study rats resistance Master candidate：Ma degree Jing Du Jianling Supervisor：Professor GuoLixin Vice—supervisor：Professor or：InternalMedicine Maj Abstract functionofskeletalmusclemitochondria ective：Tothe Obj study underthestateofinsulin theskeletalmuscle resistance IR ．Extract mitochondriaonbasisof insulin assessingsensitivityby determination respiratoryefficiency euglycemieclampexperiment，make toevlauateifthereexistsclose andfatacid statedetermination 13-oxidation musclemitochondriaand the ofskeletal between relationship dysfunction IR． Methods： as 1 diabetes 1．Establishthreeratmodels mellitus T1DM ， IR，type normal 2diabetes control NC type mellitus T2DM ，meanwhilesettingup divide50 male intoNC healthy group．Randomly rats ，T1DMgroup 15rats ，T2DMgroup 15 group 10rats ，IRgroup 10 T1DM ratswerefedwithcommon which，NCand diet