内源性硫化氢在鼠肝硬化不同时期的浓度变化及机制探讨.pdfVIP

摘 要 目的： 本研究复制肝硬化早、中、晚期大鼠模型，通过测定H2s在门静脉血及下腔静脉血中的浓度， 发生、发展过程中表达的变化，以探讨H2S在肝硬化中的作用，进一步为阐明肝硬化的发病机制提 供理论和实验依据。 挝挝和方法： 1．四氯化碳复合因素法建立肝硬化大鼠模型：40％四氯化碳棉籽油溶液给大鼠皮下注射，首次 给予高脂高胆同醇饲料。设立正常对照组大鼠，同期皮下注射生理盐水，剂量同实验组，采用标准饲 养方法。根据预实验中肝硬化形成经验，在肝硬化发生过程的不同时期收集肝硬化大鼠标本，即实 验组人鼠分3批，每批27只，分别在实验的第15天、第30天、第52天将大鼠用乙醚麻醉，收集血 浆及肝脏标本，病理学确定肝硬化分期。 2．结果观察：应用苏术素．伊红染色观察肝组织病理形态学变化，进行肝硬化分期；测定门静脉 及下腔静脉血浆H2s的含量；应用免疫组化法观察肝组织中CBS、CSE的表达，并用计算机图像分 析技术j卜定量检测其蛋白表达的强弱，灰阶值越低说明表达越强；采用逆转录PCR技术(RT．PCR) 检测CBS、CSEmRNA的表达，同时检测GAPDH的表达作为内参照，用凝胶成像分析系统半定量 l1．0软件描述实验数据特征，作单因素方差分析、独立样本t检验，相关性分析，P0．05示