小鼠dnd1慢毒载体的构建及病毒生产.pdf

摘要 目的：在本研究中，将用PCR法从小鼠10．5d胚胎cDNA文库中扩 增出的Dndl基因引入慢病毒载体系统，并生产Dndl慢病毒颗粒。 为进一步明确Dndl体外生物学功能奠定基础。 方法： 1．Dndl基因的获得 软件设计基因的特异引物Dndl—AgeI-F和Dndl—AgeI—R，并且引入 Age Dndl基因。PCR法筛选阳性克隆。 2．重组慢病毒载体转移质粒pGC—FU—Dndl的构建 I酶切回收后的PCR产物交换连接 采用In—Fusion技术，将Age 入Age DH5a感受态细胞，扩增质粒。 连接产物质粒转化大肠杆菌E．coli 3连接产物pGC—FU—Dndl的酶切鉴定 收集部分扩增后连接产物质粒，酶切后经电泳证实所得片段长度 均与预期相符，说明Dndl基因己克隆成功。基因测序结果亦证实成 功克隆Dndl基因。 4连接产物pGC—FU—Dndl质粒转染293T细胞 用脂质体Lipofectamine2000包裹构建的pGC—只『-一dndl和辅助 病毒颗粒。 结果： 片段。 (BC034897)