特发性血小板减性紫癜患儿血小板蛋白质组学的研究.pdfVIP

目录 特发性血小板减少性紫癜患儿血小板蛋白质组学的 1 研究„„„„„„„3 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„6 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„10 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„14 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„21 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„56 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„69 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„67 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„75 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„76 3 血小板蛋白质组学的研究进展 （综述） „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„77 2 特发性血小板减少性紫癜患儿血小板蛋白质组 学的研究 摘 要 目的：特发性血小板减少性紫癜( ＩＴＰ）是一种免疫介导的血小板 减少综合征，是儿童最为常见的出血性疾病。目前对ＩＴＰ的诊断依 然是 “排除诊断法”， 临床上诊断主要靠外周血小板减少但其无特 异性；抗血小板抗体测定对诊断ＩＴＰ的意义基本上是负性的;骨髓 检查创伤性大，患儿及其家属不易接受,因此我们需寻求一种能为ITP 的患儿的临床病情早期诊断，预后估计，制定个体性的治疗方案提供 依据的诊断方法。我们用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱 (surface enhanced laser desorption ／ionization—time of flight— mass spectrometry，SELDI — TOF — MS) 技术结合蛋白芯片检测特 发性血小板减少性紫癜(ITP) （治疗前）、特发性血小板减少性紫癜(ITP) （治疗后）非免疫性血小板减少症（NITP ）和正常对照组血小板蛋 白质谱的差异性表达，筛选可用于特发性血小板减小性紫癜早期诊断 及病情变化监测及判断预后的血小板蛋白质标志物，建立ITP 诊断模 型，并用ROC 曲线判断其灵敏度和特异度，在血小板蛋白质组水平 创立特发性血小板减小性紫癜的分子诊断新方法。方法：应用 SELDI-TOF-MS 检测结合在蛋白质芯片上的血小板蛋白质，获得 30 例ITP 治疗前，30 例ITP 治疗后，30 例NITP 和40 例正常对照者的 血小板蛋白表达指纹图谱，，并用 Biomarker Wizard 和 Biomarker 3 Paterns System 5 。0 软件对数据进行分析，建立人工神经网络诊断模 型，并用ROC 曲线判断其灵敏度和特异度。结果：在分子质量／电 荷比值(质荷比，mass electron ratio ，M ／Z)为2000--一20000 范围内， ITP 治疗前组与正常对照组之间有显著差异(P0 ．01) 的蛋白质峰有 27 个，其中高表达的蛋白质峰有2 个，低表达的蛋白质峰有25 个， 从分析的结果看最有意义的蛋白质是差异最显著及P 值最小(为O)的 蛋白质有四种，质荷比分别为 3130.18 、 2281.72 、 7672.06 、 5170.65 的蛋白质。这些蛋白可能为ITP 的生物标记物，其中M ／Z 是 2281.72 的蛋白未发现对应蛋白质，可能为新的蛋白质，余三种蛋白 可能为β-防卫素110 、50S核糖体蛋白质L34和60S 核糖体蛋白L41。 ITP 治疗前组与 ITP 治疗后组有显著差异(P0.01)的蛋白质峰有 25 个，均为低表达，其中有5 个蛋白亦包含在ITP 治疗前与正常对照组 中.从分析的结果看最有意义的蛋白质是差异最显著及P值最小(为O) 的蛋白质是质荷比为2574.16 、 6218.23 、 3126.14 、 4718.