5基因克隆技术资料.pptVIP

1 RACE技术 1.1 RACE技术的简介 cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。 完整的cDNA 序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。 末端克隆技术是20世纪80年代发展起来的。RACE (rapid-amplification of cDNA ends) 是一项在已知部分cDNA序列的基础上克隆5’和3’缺失（未知）序列的的技术。 分为5’ RACE和3’ RACE。 1.2 RACE的优点（了解） 与筛库法相比较，有许多方面的优点 1）此法通过PCR技术实现，无须建立cDNA文库，可短时间内获得有利用价值的信息。 2）节约了实验所花费的经费和时间。 3）只要引物设计正确，在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长。 1.3 RACE引物 RACE技术要求必须知道至少23－28个核苷酸序列信息，以此来设计5’末端和3‘末端RACE反应的基因特异性引物（GSPs）。 GSPs应该是： 23－28 nt 50－70％GC。这样可以使用降落PCR。避免使用自身互补性的引物序列；避免使用与AP1 （adaptor primer）互补的引物，尤其在3’末端。 65℃ ≤ Tm值≤ 70 ℃可以获得好的结果 需要实验者根据已有的基因序列设计5’和3’RACE反应的GSP。 1.5 RACE产物的验证 对RACE的片段进