第二章基因工程的载体和工具酶精要.pptVIP

（一）质粒的生物学特性 ⑹ 质粒的转移???????????? ???????????????????????? （二）质粒DNA的制备 有多种分离质粒的方法，如碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱过滤法等。 目前一般使用碱变性法制备质粒DNA。这个方法主要包括培养收集细菌菌体，裂解细胞，将质粒DNA与染色体DNA分开及除去蛋白质和RNA。 （三）质粒载体的改造 ⑴去掉不必要的DNA区段。 ⑵减少限制酶的识别位点，一种酶只保留一个。（单一的限制性酶切位点）。 ⑶加入易于捡出的选择性标记基因。 ⑷对质粒进行安全性改造，要求质粒不能随便 转移。 ⑸改造或增加基因表达的调控序列。 1、质粒pBR322 pBR322质粒的优点： （1）具有较小的分子量。 4363bp，2.6×106Da， （2）具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号。 （3）具较高的拷贝数，而且经过氯霉素扩增之后,每个细胞中可累积1000～3000个拷贝。 （4）对多种常见的限制性内切核酸酶只含有一个能切割的位点。 外源DNA 2、pUC质粒载体 1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技术在pBR322基础上构建的 结构： （1）来自于pBR322的Ori （2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列发生了变化 （