猪传染性胃肠炎毒全基因组克隆及n蛋白的表达.pdf

中文摘要 猪传染性胃肠炎病毒(transimissiblegastroenteriisvirus，TGEV)感染2周龄以 内仔猪，死亡率可达100％，每年冬季猪传染性胃肠炎(TGE)的流行给养猪业造 成了极大的危害。TGEV属于冠状病毒科冠状病毒属，基因组为单股正链RNA， 具有感染性，全长约28．5kb，5’端20kb编码病毒的复制酶多聚蛋白，3’端约 8．3kb包括通过亚基因组RNA表达的全部基因组，编码4种结构蛋白(s、sM、 M、N)和4种非结构蛋白，这些蛋白在病毒的生活周期中都具有重要的作用。 对TGEV地方分离株基因组的全面了解和重要蛋白的表达研究有利于揭示 该病毒的分子遗传背景和分子致病机制，为TGEV的病原分子生物学、诊断学 和基因组学研究奠定基础。本文根据猪传染性胃肠炎病毒的生物学特征，分离l 全长cDNA：并对重要的结构蛋白制蛋白进行了表达研究。 将疑似感染TGEV的仔猪腹泻病科匀浆，取上清液接种ST细胞，待盲传至 第8代，ST细胞可出现明显的细胞病变，收集第8代接毒细胞制备细胞飞片， 通过直接荧光抗体技术在接毒的细胞浆中观察到了特异性的免疫荧光，收集接毒 细胞制备电镜超薄切片，在透射电子显微镜下观察到了内质网中的病毒样粒子。 序列设计引物，从接毒细