猪肉弓形虫检验法的研究.pdfVIP

上小波 猪肉弓形虫检验方法的研究 中文摘要 本研究首先建立猪弓形虫抗体间接ELISA检测方法。在试验中比较了三种纯 化弓形虫速殖子的方法。试验结果显示，植物血凝素(PHA．P)法虫体回收率和白 细胞清除率均超过98％，只有1．5％的白细胞未被清除，大大减少了ELISA抗原 所致的非特异性反应，所以本研究应用植物血凝素法纯化弓形虫速殖子。通过对 弓形虫速殖子纯化后经超声波裂解的可溶性蛋白抗原进行包被，建立间接ELISA 方法检测猪弓形虫IgG抗体。 其次建立双重PCR检测方法，据弓形虫基因组B1基因与529bp的重复基因 片断设计并合成两对引物，建立快速、准确、灵敏、稳定的双重PCR检测猪弓形 虫的方法。灵敏度试验结果可检测到20fg弓形虫基因组DNA水平，结果表明此 双重PCR方法灵敏度高；特异性试验检测包括鸡柔嫩艾美耳球虫、牛肉孢子虫、 猪肉孢子虫、旋毛虫等16种病原微生物，结果均为阴性，结果表明此双重PCR方 法特异性强。 将采自兽医院门诊及肉联厂、屠宰场的511份猪血清样品分别用建立的间接 宰场15l份屠猪血清样品，阳性及可疑的血清样品共计49份。用DT、IHA和间 接EL／SA平行检测此49份血清样品。结果49份血清样