以P2X7受体为靶标的高通量筛选方法.pdfVIP

2013 年 第 58 卷 第 18 期： 1739 ~ 1747 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS 以P2X7 受体为靶标的高通量筛选方法 ①② ①② ①* 蒋亚琴 , 尹琪 , 栗世铀 ① 中国科学院北京基因组研究所, 基因组科学及信息重点实验室, 北京 100029; ② 中国科学院大学, 北京 100049 * 联系人, E-mail: lishiyou@ 2012-06-05 收稿, 2012-09-17 接受, 2013-06-14 网络版发表 中国科学院“百人计划”(2006-067)和国家自然科学基金资助 摘要 P2X7 受体是嘌呤-配体门控离子通道受体家族P2X 的一员. 一些研究表明, P2X7 受 关键词 体主要在上皮细胞和免疫系统细胞中表达, 参与免疫调节的过程, 如炎性细胞因子释放、 人源P2X7 受体 膜融合及细胞凋亡. P2X7 受体是神经退行性疾病、类风湿关节炎、神经性疼痛药物筛选的 高通量药物筛选 重要靶标, 已成为大型制药公司新的研究热点. 构建表达人源 P2X 受体(hP2X R) 的人胚 荧光成像分析系统 7 7 膜电位检测 肾细胞系HEK-293, 利用荧光成像分析系统(FlexStation), 针对 P2X7 受体特性, 比较和验 溴化乙啶内吞检测 证了3 种用于检测P2X7 受体高表达细胞系药理学特征的高通量荧光检测方法, 分别是膜 钙内流检测 电位检测法、溴化乙啶内吞检测法和钙内流检测法. 对3 种不同方法的比较研究表明, 钙 内流检测法简便、快捷, 更适用于P2X7 受体调节剂的低成本、高通量药物筛选. P2X7 受体属于配体门控通道 P2X 受体家族, 属 的短时间刺激下, 形成非选择性阳离子通道, 从而介 [13] 胞外核苷酸受体, 是继烟碱受体家族和谷氨酸受体 导细胞对钠离子、钾离子和钙离子等的通透性 , 并 家族后第 3 类配体门控离子通道, 配体是 ATP 导致细胞膜去极化. 离子内流和膜电位的变化都可 (adenosine-5′-triphosphate). 迄今为止已经从哺乳动 用于建立P2X7 受体的筛选检测方法. 物细胞中克隆了7 个P2X 亚单位, 按照分布、离子通 电生理方法是公认的检测离子通道受体功能的 透特性及对 ATP 的亲和力不同, 命名为 P2X1~7 受 黄金标准, 其中得到广泛应用的是全细胞膜片钳技 [1,2] 体 . P2X7 受