鳖源胶原蛋白的提取工艺优化及结构表征.pdfVIP

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１２期 — ２６５— 田永通，沈欢欢，宋　伟，等．鳖源胶原蛋白的提取工艺优化及结构表征［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１２）：２６５－２６９． 鳖源胶原蛋白的提取工艺优化及结构表征 田永通，沈欢欢，宋　伟，毛玉婷，周奕如，彭　茜，李彩燕，钱国英 （浙江万里学院生物与环境学院，浙江宁波３１５１００） 　　摘要：为了研究新型鳖源胶原蛋白的提取方法及结构特征，以中华鳖的裙边为提取材料，比较酸法、碱法和酶法的 提取效果，通过单因素正交试验设计优化酶种类、酶解温度、酶用量、底物浓度和提取时间等主要参数，并采用ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ电泳、ＨＰＬＣ、紫外扫描等方法分析胶原蛋白的生化特征。结果表明，酶法提取中华鳖裙边胶原蛋白的效果最 好，提取用酶为胃蛋白酶，最佳提取工艺为温度４０℃，酶用量１ｍｇ／ｍＬ，底物浓度２５％，提取时间２０ｈ，该优化条件下 胶原蛋白的提取率高达７５．２３％，得到的胶原蛋白为 型胶原蛋白，其甘氨酸含量最高，且有特征吸收峰。 Ⅰ 　　关键词：中华鳖；裙边；胶原蛋白；提取优化；结构表征 ＋ 　　中图分类号：ＴＳ２０１．２１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１２－０２６５－０５ 　　胶原蛋白（ｃｏｌｌａｇｅｎ）是生物体细胞外基质的主要成分，约 肉中脂肪酸含量丰富，鳖甲周围的结缔软组织通常被称为 占胶原纤维固体物的８５％，占动物体内蛋白质总量的２５％～ “裙边”，胶原蛋白含量十分丰富，超过６０％，是最滋补的部 ［７］ ３０％，它广泛存在于动物的各种结缔组织中（如软骨、皮肤、 分，具有极高的营养与美容价值 。 键、韧等），对机体和脏器起着支持、保护、结合及形成界隔的 本试验基于新型生物制品的研发及中华鳖的综合开发利 ［１］ 作用 。胶原蛋白能补充机体氨基酸，使皮肤胶原蛋白活性 用，探讨中华鳖裙边胶原蛋白的提取及工艺优化，采用单因素 加强，保持角质层水分及纤维结构完整，促进皮肤组织新陈代 试验和正交试验设计比较酶种类、酶解温度、酶添加量、底物 谢，增强循环，延缓衰老；与周围组织亲和性好，有独特的修复 浓度、酶解时间对胶原蛋白提取率的影响，并分析了胶原蛋白 功能；能通过螺旋结构将分子内氢键所结合的水分子紧锁内 的生化特征，以期为中华鳖及其他龟鳖动物胶原多肽的开发 ［２］ 部，有良好的保湿功效 。由于胶原蛋白的特殊生理功能， 提供科学依据。 其应用日趋广泛。长期以来，人们都是使用猪、牛的皮和骨提 １　材料与方法 取胶原蛋白和明胶，但口蹄疫、疯牛病、禽流感等疾病的暴发， 使人们对畜牧胶原制品的安全性产生疑虑；另外，由于宗教和 １．１　材料 习俗等原因，有些地区不能使用牲畜胶原制品。因此，寻找胶 １．１．１　材料与试剂　试验所用中华鳖购于宁波当地人工养 ［３］ 原蛋白的新来源显得愈来愈迫切 。目前人们普遍利用蛙 殖场，体重约５００ｇ。先将中华鳖放血后致死，再将其裙边、肌 ［４］ ［５］ ［６］ 皮 、鱼皮 、鱼鳞 等水产动物原料提取胶原蛋白，而对于 肉、皮肤等分离后装入密封袋，于－２０℃冷藏备用。胃蛋白 本身就富含胶原蛋白的中华鳖原料研究甚少。 酶（３０００Ｕ／ｇ）、胰蛋 白酶 （１０００Ｕ／ｇ）、木瓜蛋 白酶 中华鳖（ Ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ），别称水鱼、团鱼、鼋鱼、元鱼、 （３５００Ｕ／ｇ）、醋酸－柠檬酸缓冲液（ｐＨ值６．０）、氯胺Ｔ水溶 老鳖、王八，自古就是我国传统的营养滋补佳品，具有很高的 液、Ｌ