发酵工程复习整理概述.doc

第一章 绪论 一分离技术选择的基本原则 1)、尽可能简单、低耗、高效、快速。 2)、分离步骤尽可能少。 分离方案的设计 1）产品（杂质）的性质和价值 2）产品的质量要求 3）产物（杂质）在粗产品中的特征 4）生产的规模 5）环境影响 二 上游工艺—生物反应器及大规模细胞培养 生物反应过程的核心问题是细胞的生长 均衡生长模型：用“浓度”这一个量来描述细胞生长 一、细胞浓度的测定 :生长测定常用理化方法，分为测定细胞数目和细胞重量两类:1计数器计数法 ,2 浊度计比浊法 , 3 细胞干重称量法4平板菌落计数法, 5 细胞组成分析法 二 、细胞的生长一般分五个阶段： 迟缓期（适应期） 指数生长期 减速期 静止期（平衡期） 衰退期（死亡期） 细胞生长动力学 细胞生长的速率、各种基质组分消耗的速率、代谢产物的生成速率。 三、比生长速率 当X2=2X1时，此式可求得△t=td（细胞浓度倍增时间）： td=ln2/μ=0.693/μ 四生物反应器的类型 五、体积传氧系数的测定方法 氧气吸收的体积传递系数，可采用下列几种方 法测定： ①直接测量法 ②亚硫酸盐氧化法 ③动态法 六、放大原则：通气发酵罐的放大设计： (一)几何相似放大 （二）以单位体积液体中搅拌功率P0 /VL相等的准则进行反应器放大 （三）以体积溶氧系数KLa相等为基准的放大法 (四)以搅拌叶尖端线速度相等的准则进行反应器放大 (五)混合时间相同的准则 七、生物反应器的检测及控制 设定参数 1．压强2．温度3．通气量4．液面5．搅拌转速与搅拌功率6．泡沫高度7．培养基流加速度8．冷却介质流量与速度9．培养基质浓度和产物浓度 状态参数1．黏度（或表观黏度）2．pH3．溶氧浓度和氧化还原电位4．发酵液中溶解CO2浓度5．细胞浓度6．菌体形态 第二章、动物细胞大规模培养和专用生物反应器 一、体外培养动物细胞的生长增殖过程 原代培养期:从体内取出组织接种培养到第一次传代培养这个阶段，一般持续1-4周。这个阶段细胞比较活跃，有细胞分裂，但不旺盛。(由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。 传代期：从原代培养的细胞一经传代后便称细胞系。细胞增殖旺盛，当传代10-50次后，细胞增殖缓慢，以致完全停止。 衰退期：细胞增殖缓慢或不增殖。细胞轮廓增强，最后衰退凋亡。 二、培养细胞生长的条件 细胞的营养需要 细胞的生存环境 温度: 37 ℃、O2、CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3- pH: 7.2-7.4 渗透压 无污染 无毒 三 培养基：培养基（培养液）是维持细胞体外生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。 四、无血清培养基优点： ①提高重复性②减少微生物污染③供应充足稳定④产品易纯化 ⑤避免血清因素对细胞的毒性⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰 五、补充因子又可归类为必需补充因子和特殊补充因子。 完全培养基的组成 基础培养基 80％一95％ 血清 5％一20％ 青、链霉素 各100U／ml 六 传代细胞培养 根据细胞生长的特点，传代细胞培养有3种： 1．悬浮培养 2．贴壁培养 3. 固定化培养 七 每代贴附生长细胞的生长过程 游离期、贴壁期、潜伏期、对数生长期、停止期（平台期） 细胞计数：1.细胞计数板 2.MTT比色法 八 冻存和复苏的原则：慢冻快融 常用的低温保护剂是DMSO 九 常用的细胞固定化的方法主要有吸附、共价贴附、离子/共价交联、包埋和微囊化等。 十 吸附法 1）转瓶法 2）微载体法 3）中空纤维法 包埋法：包埋法根据载体与方法不同，亦有凝胶包埋法和半透膜包埋法两种 十一 、细胞大规模培养的操作方式 培养方式分为： 分批式 流加式 半连续式 连续式 灌注式 灌注培养 灌注培养：是把细胞接种后进行培养，新鲜的培养液从反应器一头不断加入，从另一头不断取出等量的培养液，细胞仍留在反应器内，使细胞处于一种营养不断的状态。 特点：高密度培养动物细胞。 十二 动物细胞大规模培养反应器 ⒈搅拌式生物反应器 ⒉气升式生物反应器 ⒊中空纤维式生物反应器 ⒋透析袋或膜式生物反应器 ⒌固定床或流化床式生物反应器 1、通气搅拌式细胞培养反应器 反应器的优缺点 优点：避免向培养基直接通气时气泡损伤细胞，没有移动部件，密封好，便于放大。 缺点：氧传递系数小，气路系统不能就地灭菌。 2、气升式生物反应器 优点:器内湍流温和均匀剪切力小，完全密封，便于无菌操作，氧的转换率高，便于放大生产。 3、中空纤维细胞培养反应