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对紫杉醇及其类似物的研究 红豆杉 目录 紫杉醇的背景 类似物的设计及合成路线 产物分析方法 生物活性测试方法 关于紫杉醇 关于紫杉醇 1963年美国化学家瓦尼和沃尔首次从一种生长在美国西部大森林中称谓太平洋杉树皮和木材中分离到了紫杉醇的粗提物。在筛选实验红豆杉中，瓦尼和沃尔发现紫杉醇粗提物对离体培养的鼠肿瘤细胞有很高活性，并开始分离这种活性成份。由于该活性成份在植物中含量极低，直到1971年，他们才同杜克大学的化学教授姆克法尔合作，通过x-射线分析确定了该活性成份的化学结构——一种四环二萜化合物，并把它命名为紫杉醇。 紫杉醇通过抑制微管解聚使肿瘤细胞的有丝分裂终止及使肿瘤细胞凋亡，最后导致肿瘤细胞死亡。 类似物的设计及合成路线 紫杉醇 类似物1 类似物2 类似物3 紫杉醇先与对甲基苯磺酰氯室温反应生成对甲基苯磺酸酯衍生物，衍生物再和甲烷格氏试剂反应烷基化，生成目标产物。 一、羟基变成烷基的等电子体的转换 二、羟基变成氨基的等电子体的转换 紫杉醇与叠氮化钠反应羟基被叠氮集团取代，得到叠氮化合物，叠氮化合物在室温下被钯碳还原生成目标产物。 三、羟基变成氟原子的等电子体的转换 紫杉醇在二乙胺基三氟化硫（DAST）的试剂的存在下发生亲核取代得到目标产物。 核磁氢谱 红外光谱分析。 反相高效液相色谱法（紫杉醇及其类似物的含量进行测定） ＨＰＬＣ内标法 固相萃取－高效液相联用（ＳＰＥ－ＨＰＬＣ） 液相色谱－质谱联用（ＬＣ／ＭＳ） 。 产物分析方法 反相高效液相色谱法 1、仪器：（文献报道） 岛津的LC-6A型高效液相色谱仪 SPD-6AV紫外可见分光检测器 色谱柱为岛津CLC-phenyl6.0㎜×150㎜， 10μm的苯基反相柱 分别进行等度洗脱和梯度洗脱 反相高效液相色谱 2、含量的测定： 取滤液20μL注入高效液相色谱仪，用等梯度或梯度方法洗脱，标准曲线外标法定量，计算紫杉醇及其类似物的含量。 生物活性测试 1、C 2位苯甲酰基对生物活性的影响 对于已经合成的 C2 位去苯甲酰基紫杉醇类似物，发现其活性比紫杉醇更低，由此证明 C2 位苯甲酰基对生物活性是至关重要的。它的重要性在于: 把紫杉醇生物活性和侧链、 C2 位、 C4 位之间的疏水缝隙联系在一起。 生物活性测试 2、C2’ 位羟基对生物活性的影响及其前药的研究 C2’位羟基是非常重要的结构单元， 酯化或酰化后会使体外活性降低，但在体内活性变化不大。要想使紫杉醇 C2’位衍生化成为前药，除了水溶性和活性增加以外， 还必须具备较高的稳定性。 生物活性测试 3、C3’位苯基对生物活性的影响 C3’苯基为重要的生物活性必需单元。 如果用疏水性取代基或者芳香性取代基取代 C3’苯基对紫杉醇活性影响不大。 生物活性测试 4、检测三种类似物的抗肿瘤活性 分别取等量的某型肿瘤组织若干份在相同的适宜环境下分开进行体外培养，待条件成熟后，分别加入等量的以上三种类似物及紫杉醇，一定时间后，查看肿瘤组织生长情况来查看三种类似物的抗肿瘤活性。