htgf-β1因在体转染兔退变腰椎间盘髓核细胞的实验研究.pdfVIP

中文 摘 要 hTGF-5，基因在体转染 兔退变腰椎间盘髓核细胞的实验研究 摘 要 目的:观察hTGF-0，基因在体转染兔退变腰椎间盘 髓核细胞后的表达，为基因治疗椎间盘退变提供实验基 础。 方法 1.动物模型的建立:选择纯种成年新西兰大白兔 24 只，雌雄不限，体重平均2.5公斤，从右侧腰椎侧前方入 路，于腹膜外显露椎间盘，分别于L3.4,L4.5,L5_0,L0-:注 射0.02ml生理盐水，术后予以分笼饲养，12周后行兔腰 椎X光片及病理切片观察模型构建情况。 2.重组质粒DNA载体的扩增:①采用划痕法在平板 培养基上接种大肠杆菌JM109菌液，37℃过夜培养，挑 选单菌落于液体培养基中37℃剧烈摇震培养至 OD260= 0.3-0.40②采用CaCL2法制备大肠杆菌感受态，然后加 入含有目的基因的质粒DNA，通过42℃热休克转化至大 肠杆菌体内，继续于液体培养基中过夜培养。③将培养好 的菌液平铺于含有抗生素和X-gal,IPTG的平板培养基 中，通过抗药性筛选及蓝白斑实验挑选