sirna沉默la-e基因增强肝癌细胞nk敏感性.pdf

中文摘要 i 目的研究小分子干扰RNA(SRNA)特异性抑制人肝癌HepG2细胞外源性 绿色荧光蛋白(GFP)报告基冈瞬时表达的可行性，并定量分析siRNA基因沉默的 效率，为后续可能的基冈治疗提供参考。 探讨干扰素Y(IFN—Y)诱导人肝癌细胞系BEL一7402表达非经典人类白细胞 抗原I类分子(HLA-E)，及其对NK细胞毒性作用的影响。 同时观察肝癌患者癌组纱l、远处硬化组钐{中经典HLA—I(HLA—ABC)、HLA—E、 抗原提呈辅助分子(13。微球蛋白、转运抗原相关蛋白TAP)表达水平，及判断肝 癌肝移植手术预后的可行性及其价值。 针对HLA-EmRNA靶序列中不同位点设计、合成多个siRNA链，定量分析它 们对HLA-E(+)的肝癌BEL-7402细胞的基冈沉默效率，筛选最佳抑制效果的 SiRNA。 方法凝胶电泳观察siRNA体外含10％血清或空白细胞培养液孵育12h后 的降解性。利用荧光标记示踪技术，观察红色荧光(Cy3)标记siRNA经脂质体 Lipofectamin2000转染HepG2的转染率和细胞动力学变化。同时将报告基因 (GFP)表达质粒、相关的siRNA经脂质体Lipof