第五章如何提升发酵过程的生产能力和技术水平资料.pptVIP

* * 合成谷氨酸的生化途径 葡萄糖 丙酮酸 草酰乙酸 柠檬酸 琥珀酸 透过细胞膜 异柠檬酸 α- 酮戊二酸 谷氨酸 谷氨酸 （一）、GA 的生物合成途径 主要有：Glucose的酵解，EMP Glucose的有氧氧化，HMP 丙酮酸的有氧氧化，TCA循环 乙醛酸循环途径，DCA循环 CO2固定反应 α-酮戊二酸（ α-KGA）的还原氨基化 这6条途径之间是相互联系、相互制约，如下图所示： C6H12O6 HMP 3-磷酸甘油醛 丙 酮 酸 乙酰辅酶A CO2 草酰乙酸 柠 檬 酸 苹果酸 异柠檬酸 延胡索酸 琥珀酸 NADPH α-KGA NADPH NH4+ 谷氨酸 乳酸 GA 的生物合成途径 乙酰辅酶A 乙醛酸循环 乙醛酸 EMP TCA 谷氨酸 CO2固定 透过 细胞膜 α-KGA的还原氨基化 谷氨酸产生菌的主要特征:内在因素 1. ?-酮戊二酸氧化能力微弱: ?-酮戊二酸脱氢酶丧失或活性低. 2. 谷氨酸脱氢酶活性强. 3. 还原性辅酶Ⅱ(NADPH+H+)进入呼吸链能力缺陷或微弱. 4. 异柠檬酸裂解酶活力微弱. 5. 不利用谷氨酸. 6. 耐高糖耐高谷氨酸 . 7. CO2固定能力强. 8 .解除谷氨酸反馈抑制. 9. 具有向胞外分泌谷氨酸的能力. 谷氨酸发酵外部因素：发酵条件与产物的关系 控制因子 发酵产品转换 氧气 乳酸或琥珀酸（通气不足）←→谷氨酸（通气充足） NH4+ α-酮戊二酸（缺乏）←→谷氨酸（适量）←→谷氨酰胺（过量） pH N-乙酰谷氨酰胺（酸性）←→谷氨酸（中性或微碱性） 磷酸 缬氨酸（高浓度）←→谷氨酸 生物素 乳酸或琥珀酸（丰富）←→谷氨酸（缺乏） 代谢的人工控制及其在发酵工业中的应用 工业发酵的目的：大量积累人们所需要的微生物代谢产物。 代谢的人工控制：人为地打破微生物的代谢控制体系，使代谢朝着人们希望的方向进行。 人工控制代谢的手段： (1)改变微生物遗传特性(遗传学方法，如营养缺陷型菌株；筛选抗反馈控制突变株；选育组成型突变株和超产突变株）； (2)控制发酵条件（生物化学方法）； (3)改变细胞膜透性； 总结 （二）生物化学方法 1. 添加前体* ，绕过反馈控制点，能使某种代谢产物大量产生。 2. 添加诱导剂：从提高诱导酶合成量来说，最好的诱导剂往往不是该酶的底物，而是底物的衍生物。 3. 发酵与分离过程耦合。 4. 控制发酵的培养基成分。 **在微生物的生物合成过程中，有些化合物能直接被微生物利用构成产物分子结构的一部分，而化合物本身的结构没有大的变化，这些物质称为前体。 （三）控制细胞膜渗透性 使胞内的代谢产物迅速渗漏出去,解除末端产物的反馈抑制。 1. 用生理学手段—— 直接抑制膜的合成或使膜受缺损 如: 在Glu发酵中把生物素浓度控制在亚适量可大量分泌Glu； 控制生物素的含量可改变细胞膜的成分，进而改变膜透性； 当培养液中生物素含量较高时采用适量添加青霉素的方法； 2. 利用膜缺损突变株—油酸缺陷型、甘油缺陷型 如:用谷氨酸生产菌的油酸缺陷型，培养过程中，有限制地添加油酸，合成有缺损的膜，使细胞膜发生渗漏而提高谷氨酸产量。 甘油缺陷型菌株的细胞膜中磷脂含量比野生型菌株低，易造成谷氨酸大量渗漏。应用甘油缺陷型菌株，就是在生物素或油酸过量的情况下，适量添加青霉素也可以获得大量谷氨酸。