培养细胞对糖代异常环境的基因应答研究.pdfVIP

培养细胞对糖代谢异常环境的基因应答研究 目的：通过研究体外培养细胞在严格控制的条件下对微环境内、外糖代谢基本物 质含量变化的基因应答，深入探索发生在糖尿病视网膜病变中的糖生物学 调控机制。 方法：建立稳定的正常人二倍体成纤维细胞与各物种血管内皮细胞的无糖培养环 境，为单因素分析实验打下基础；在模拟生理条件激活细胞膜糖转运系统 后，精确改变培养环境内基本糖代谢物质以及关键中间产物的含量，了解 上述细胞的生物学行为应答：运用DNA分子杂交原理与抑制性PCR技术构 建样本闻差异表达基因的cDNA克隆文库。 结果：人成纤维细胞和各种血管内皮细胞能够在传代期以无糖培养基替换原有培 养基必要的时间而不影响细胞增殖，这将有利于其后药物刺激实验的精确 进行和差异表达基因的克隆。与对照组比较，20mM葡萄糖培养环境对各 种细胞的生长特性产生不良影响，作用4小时后使细胞膜收缩，形态变圆， 贴壁质量下降，细胞数量减少；使用消减杂交技术成功构建出人血管内皮 细胞样本间差异表达基因的cDNA文库，转染ToplO大肠肝菌后从T载体 内克隆出特异性的差异cDNA，表明培养细胞在转录水平发生了活跃的改