基因改造k细胞疗ⅰ型糖尿病的实验研究.pdf

中英文摘要 基因改造K细胞治疗I型糖尿病的实验研究 中文摘要 研究背景和目的：I型糖尿病是由于自身免疫反应破坏胰腺B细胞，导致胰岛素 分泌绝对不足，但是，外源性胰岛素注射无法正确控制血糖而导致慢性并发症。 胰腺或胰岛移植可以重建内源性胰岛素的分泌，然而供体不足和免疫抑制剂的使 用都限制了这一方法的运用。基因改造非B细胞治疗I型糖尿病是目前研究的方 向，它需要能根据生理性的血糖浓度变化合成和分泌有生物活性胰岛素的靶细胞 以替代胰岛8细胞的作用。我们利用糖反应性的启动予和人胰岛素基因改造K 细胞，使其分泌有生物活性的成熟胰岛素并能够受葡萄糖的调控，探索代替胰岛 素注射或胰岛移植治疗I型糖尿病的方法。 方法：将大鼠糖依赖性胰样多肽(GIP)启动子插入以萤虫素酶为报告基因的载 酶活性。将人胰岛素基因置于GIP启动子控制下，构建重组质粒 细胞的体外研究模型)，筛选稳定表达胰岛素的细胞株。改变单克隆细胞株培养 液中葡萄糖浓度，RIA法检铡胰岛素的表达。链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立 糖尿病裸鼠模型，将基因改造过的细胞株以1×107移植到糖尿病裸鼠皮下，监 测裸鼠血糖、体重及胰岛素水平变化。 结果：萤虫素酶活性测定证实葡萄糖上调GIP启动子的转录活性，质粒 STC一卜2和STC一卜1