磁性纳米微粒介的表达endostatin的条件复制型腺病毒载体对肝癌的治疗作用研究.pdf

中山大学附属第二医院博士后出站报告 摘要 摘要 目的 构建表达内皮抑素(endostatin)基因的条件复制型腺病毒载体，在体、 内外研究其对肝癌生长的抑制作用、及作用机制以及治疗的有效性、安全性；研 究磁性壳聚糖纳米颗粒对条件复制型腺病毒载体靶向定位及、基因转染、治疗安 全性的作用。 方法 以野生型腺病毒Ad5基因组为模板，利用PCR分别扩增腺病毒基因组Ela、 将以上基因序列克隆到腺病毒包装系统中的穿梭质粒pDC316中，然后与腺病毒 骨架质粒pAdeno—x共同转染低传代的293LP细胞中进行病毒包装；包装成功的 病毒利用高传代的293ST细胞进行病毒扩增，然后进行病毒的纯化、鉴定；利用 流式细胞术分析病毒载体在肝癌细胞HepG。和人脐静脉血管内皮细胞HUVEC中的 转染效率；利用RT--PCR、免疫组织化学技术、WesternBlot、ELISA技术检测 不同基因载体对目的基因表达的影响；利用PCR技术、腺病毒滴度检测试剂盒以 及透射电镜检测病毒转染后细胞内病毒颗粒的复制；利用MTT试验检测病毒载体 对细胞增殖的影响：利用流式细胞术检测病毒载体对细胞周期及细胞凋亡的影 响；利用