实验四动物血液中DNA提取-教案.docVIP

授课教师 常祖明 学生人数 55 课 题 血液基因组DNA的提取 授课类型 新授课 授课方法 讲授、演示 教学用具 多媒体、实验室设备 教学目的 掌握鸡血DNA提取的原理及方法 教学重点 理解实验过程中每一步操作的目的及原理 教学难点 教学过程 一、实验目的 1.掌握鸡血DNA提取的原理； 2.掌握鸡血DNA提取的方法及操作过程。 二、实验原理 哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济℃ 2.离心机：8000转、12000转 3.离心管：5ml（120个） 4.移液枪：10μl、680μl、700μl、800μl 、900μl 、1ml 5.容量瓶：100ml 6.取血针及管 四、实验材料及药品 实验材料：普通家鸡：需血液4.08ml（每管136(l） 1.无水乙醇 作用：DNA沉淀剂、洗涤剂。 商品信息：瓶/500ml，分析纯AR。 理化性质：无色澄清液体。有灼烧味。易流动。极易从空气中吸收水分，能与水和氯仿、乙醚等多种有机溶剂以任意比例互溶。储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过30。保持容器密封。应与氧化剂、酸类、碱金属、胺类等分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。易燃，具刺激性。蒸气与空气能形成爆炸性混合物，爆炸极限3.5%～18.0%（体积）无臭，有很强的酸味在潮湿的空气中微有潮解性在湿空气中有轻微潮解柠檬酸浓溶液对黏膜有刺激作用。柠檬酸可燃。粉体与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧爆炸的危险。能与血液中的钙离子结合成螯合物，而使钙离子失去凝血作用，从而阻止血液凝固。?常温密闭保存无毒尿素能非常有效地使蛋白质变性，尤其能非常有效地破坏非共价键结合的蛋白质。（塑料瓶装）避免与皮肤和眼睛接触。白色或淡黄色粉末溶解性：溶于水，呈透明溶液，溶液呈中性易溶于热水，溶于水，溶于热乙醇，微溶于醇，不溶于氯仿、醚。密封阴凉干燥保存?防止受潮受热对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用。可引起呼吸系统过敏性反应。该品可燃，具刺激性，具致敏性。遇明火、高热可燃。受高热分解放出有毒的气体。无色澄清Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性的化学物质。：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。 作用：配制0.5M EDTA（PH8.0）溶液。螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制脱氧核糖核酸酶（DNase）活性，活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。无味无臭或微咸的白色或乳白色结晶或颗粒状粉末。溶于水，不溶于乙醇、乙醚其水溶液pH值约为5.3。可由EDTA与氢氧化钠和碳酸钙作用制得。储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。应与氧化剂分开存放，切忌混储。配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物。危害：对粘膜和上呼吸道有刺激作用。对眼睛、皮肤有刺激作用。本品可燃，具刺激性。 蛋白酶20mg/mL）1ml/支。 理化性质：一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌中纯化得到。 储存危害：为浅黄色透明液体，上层为Tris-HCl溶液，加有抗氧化的0.25%?8-羟基喹啉和0.1%的β-巯基乙醇。4℃避光保存Tris饱和酚有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤直接接触或吸入体内。如发现变为黄色或棕色，表明发生氧化，不能使用。三氯甲烷无色透明