斑点酶免疫渗滤检测脑膜炎球菌、单纯疱疹病毒巨细胞病毒及新型隐球菌抗原实验方法的建立.pdfVIP

中文摘要 斑点酶免疫渗滤法检测脑膜炎球菌、单纯疱疹病毒、 巨细胞病毒及新型隐球菌抗原实验方法的建立 摘 要 目的：建立用斑点酶免疫渗滤法(Dot Filtration 疱疹病毒、巨细胞病毒、新型隐球菌抗原的诊断方法，为进 一步研制检测急性脑(膜)炎病原体蛋白芯片试剂盒提供实 验依据。 方法： 1建立用斑点酶免疫渗滤法检测已知的脑膜炎双球菌 (A群)抗原：制备抗原，按二倍顺序稀释法将抗原、抗体 及酶标抗体稀释成不同浓度；用方阵滴定法确定所有试验点 及其相应的抗原抗体反应浓度；判读实验结果并用分析软件 读取光密度值(OD值)，统计学分析得出最佳反应组合及反 应方程。 2建立用斑点酶免疫渗滤法检测已知的单纯疱疹病毒 抗原：用二倍顺序稀释法将抗原、抗体及酶标抗体稀释成不 同浓度，用方阵滴定法确定所有试验点及其相应的抗原抗体 反应浓度；判读实验结果并用分析软件读取光密度值(0D 值)，统计学分析得出最佳反应组合及反应方程。 3建立用斑点酶免疫渗滤法检测已知的巨细胞病毒抗 原：用二倍顺序稀释法将抗原、抗体及酶标抗体稀释成不同 浓度，用方阵滴定法确定所有试验点及其相应的抗原抗体反 应浓度；判读实验结果并用分析软件读取光密度值(OD值)， 统计学分析得出最佳反应组合及反应方程。 中文摘要 4建立用斑点酶免疫渗滤法检测已知的新型隐球菌抗 原：制备抗原，用二倍顺序稀释法将抗原、抗体及酶标抗体 稀释成不同浓度，用方阵滴定法确定所有试验点及其相应的 抗原抗体反应浓度；判读实验结果并用分析软件读取光密度 值(OD值)，统计学分析得出最佳反应组合及反应方程。 结果： 1斑点酶免疫渗滤法检测已知的脑膜炎双球菌抗原的 最佳反应浓度：鼠抗(A)群脑膜炎双球菌多克隆抗体浓度 r-0．9212(P0．05)，抗原最小检出浓度33．7 ng／ml(1：3200)； 对照均为阴性，无非特异性反应。 鼠抗(A)群脑膜炎双球菌单克隆抗体浓度0．3125∥∥皿 (1：320)与抗鼠／兔通用型酶标抗体浓度1：10为最佳反应浓度 ng／ml (1：6400)；对照均为阴性，无非特异性反应。 2斑点酶免疫渗滤法检测已知的单纯疱疹病毒抗原的 最佳反应滴度为：兔抗单纯疱疹病毒多克隆抗体浓度8．4 (PO．05)，抗原最小检出浓度66．8 为阴性，无非特异性反应。 3斑点酶免疫渗滤法检测已知的巨细胞病毒抗原的最 佳反应滴度为：兔抗巨细胞病毒多克隆抗体浓度12．5∥∥IIll (1：160)与抗鼠／兔通用型酶标抗体浓度1：10。稀释抗原建立 2 中文摘要 抗原最小检出浓度55．7 非特异性反应。 4斑点酶免疫渗滤法检测已知的新型隐球菌抗原的最 佳反应滴度为：鼠抗新型隐球菌单克隆抗体浓度2．5∥g／ml (1：80)与抗鼠／兔通用型酶标抗体浓度1：10。建立不同稀释 浓度的抗原与A值变化关系的标准曲线，求出回归方程 小检出浓度8．7 反应。 结论： 初步建立了用斑点酶免疫渗滤法检测脑膜炎双球菌(A 群)、单纯疱疹病毒抗原、巨细胞病毒抗原、新型隐球菌抗 原的实验方法。用已知鼠抗A群脑膜炎双球菌多克隆抗体、 单克隆抗体检测脑膜炎双球菌抗原反应的抗原最小检出浓 度分别为33．7 ng／ml矛116．8ng／ml；已知兔抗单纯疱疹病毒多 克隆抗体检测单纯疱疹病毒，抗原最小检出浓度66．8 ng／ml； 已知兔抗巨细胞病毒多克隆抗体检测巨细胞病毒，抗原最小 检出浓度55．7 ng／ml；已知鼠抗新型隐球菌单克隆抗体检测新 型隐球菌，抗原最小检出浓度8．7