虾夷扇贝和栉孔贝精子的冷冻保存研究.pdfVIP

虾夷扇贝和栉子L扇贝精子冷冻保存研究 摘要 由于过渡开发利用，养殖环境恶化，再加之长期近亲繁育致使我 国扇贝野生种群数量下降，养殖扇贝的遗传多样性以及抗逆性等方面 呈现F降趋势。雌雄发育不同步和繁殖时间的差异给苗种生产以及育 种研究带来了许多困难。精子冷的保存技术可很好地解决上述问题。 本研究以虾夷扇贝和栉孔扇贝为研究对象，对扇贝精子的超低温 冷冻和低温保存以及冷冻损伤进行了研究。以精子活力和受精率为参 、／ 数，就收集精子的方法、抗冻剂的种类和浓度、冷冻程序和平衡时间 对虾夷扇贝精子超低温保存效果的影响进行了研究，并进行了冻存精 子与栉孔扇贝卵子的杂交实验。结果表明，肾管处收集到的精液与海 水配的16％DMS0 冻精活力在40％以上。在液氮中保存ld、8d、30d、90d后解冻，冷 冻精子活力没有显著差异(p口∞，但明显低于鲜精的精子活力。 虾夷扇贝的冻精可以使栉孔扇贝卵子受精，受精率在20％以上，并 能得到正常的D型幼虫。应用透射电镜和扫描电镜技术，研究了超 低温冷冻保存前后虾夷扇贝精子超微结构和形态的变化。结果显示， 虾夷扇贝精子由头部，中段和尾部三部分组成，外被光滑质膜：顶体 位于头部最前端，呈倒“v”形，细胞核近似圆柱状，电子密度较高； 4个线粒体和2个相互垂直的中心粒构成了精子的中段：鞭毛细艮， 轴丝为典型的“9+2”结构。经超低温冷冻保存后，冷冻损伤的精子 表现为：精子被膜肿胀、被膜与核膜分离、丢失；顶体破裂、内容物 流出：线粒体解体、线粒体嵴变形；鞭毛被膜肿胀、部分精子鞭毛脱 落。町以推测，超低温冷冻保存对精子膜、顶体、线粒体和鞭毛的损 伤导致了冻精活力和受精能力的下降。 性腺内的精子处于静止状态，接触海水后大约3min才被激活， 性腺组织在4℃内保存20h后仍具有60％的精子活力。精子适宜的盐 和一18℃更能延长精子的寿命，在海水稀释组、未稀释组和抗冻剂组 中，未稀释的精液保存效果最好：保存70h后精子活力仍在40％左 右。以低温保存虾夷扇贝就精与栉孔扇贝卵子进行杂交试验，结果表 明，4C下保存3d内的精子的授精率与鲜精的自交和杂交相比没有显 著差异。杂交子代在实验室条件下可发育至D形幼虫。 关键词：精子，栉孔扇贝，虾夷扇贝，生理特性，超低温保存，低温， 杂交 and Short_term of StorageCryopreservation and yessoensisChlamys farrerj、Sperm Abstract toenvironmentaland excessive wildstockofthe Owing pollution exploitation,the wild is a forthose scallopdeclining．ConstructingspenTlcryobank scallopgermplasm conservationis moreandmore andzone becoming urgent．Asynchronous maturity distanceoffemaleandmale scallopbringhybridizationbreeding largedifficulty． offish