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真菌病血清学检查法 真菌抗原检测 隐球菌乳胶凝集试验（隐球菌荚膜多糖抗原） G试验（β-1,3-葡聚糖试验） 主要检测念珠菌、曲霉侵袭性感染，及一些少见真菌（如镰刀菌、毛孢子菌等）感染。 GM试验（半乳甘露聚糖试验） 主要检测曲霉及青霉侵袭性感染 真菌病血清学检查法 真菌抗体检测 主要用于诊断某些常规方法难以诊断的地方性机会性真菌感染，如芽生菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病、副球孢子菌病和青霉病的早期诊断和流行病学调查。 分子生物学检查法 核酸分子杂交技术 核酸扩增及序列比对技术 真菌的动物接种 动物的选择 接种方法 皮肤接种 静脉接种 腹腔注射 颅内注射 睾丸注射 动物解剖 真菌药物敏感试验 真菌药敏试验的概念 真菌药敏试验主要测定抗真菌药物对致病真菌的抑制或杀灭作用 最小抑菌浓度（MIC）：药物能抑制全部病原真菌生长时的最低浓度 MIC50 ：50%真菌被抑制时的药物浓度 MIC90 ：90%真菌被抑制时的药物浓度 最小杀菌浓度（MFC）：药物能杀死全部真菌的最低浓度 真菌药敏试验的方法 固体培养基法 琼脂稀释法（药基法） 琼脂扩散法（菌基法） 液体培养基法 多量稀释法 微量稀释法 真菌药敏试验的方法 琼脂稀释法（药基法） 在琼脂培养基平板内掺入不同浓度的抗真菌药物，以多点接种法将待检真菌接种于琼脂表面，以菌不生长的最低药物浓度定为该药对该菌的MIC。 优点：可同时测定多种菌株，易于确定终点 缺点：方法繁琐复杂 真菌药敏试验的方法 琼脂扩散法（菌基法） 将待测菌株掺入琼脂培养基内或均匀涂抹于培养基表面，将浸有固定浓度的抗真菌药液纸片置于培养基表面，或将培养基表面打孔，滴入不同浓度药液，经孵育后，根据药液纸片或培养基药液孔周围真菌生长被抑制的范围大小确定药物对该真菌的抑制作用。 优点：简单易行，不需复杂的设备 缺点：结果难以确定，仅作为定性，不能定量，标准化问题 琼脂扩散法 ROSCO纸片法 真菌药敏试验的方法 E试验（E-test）法 为一种琼脂扩散法的改良，采用标准培养基，将待测菌液涂抹于培养基表面后，置入含有以梯度浓度排列的药液条，经孵育后观察药液条周围出现的椭圆形抑菌区，以达到抑菌的最小药物浓度为MIC终点。 优点：简单易行，判断抑制终点清晰，可以进行定量测定 缺点：价格昂贵 E-test 法 真菌药敏试验的方法 多量液体稀释法 首先制备一系列含倍比稀释浓度抗真菌药物的液体培养基试管，分别在每个试管中接种一定数量的待测真菌，培养72小时后判断有无真菌生长，以没有真菌生长的试管的最低药液浓度作为该真菌的MIC值。 优点：简单易行，不需复杂的设备 缺点：终点难以确定，标准化问题，对丝状真菌的检测困难 真菌药敏试验的方法 微量液体稀释法 是多量液体稀释法的改良，将试管改为96孔微孔板，标本及试剂体积减少至0.2ml，培养时间也缩短至24小时，并以肉眼或分光光度计判断终点。 优点：简单易行，省时，损耗少 缺点：终点难以确定，标准化问题，对丝状真菌的检测困难。 微量液体稀释法 * MFC: minimum fungicide concentration MIC: minimum inhibitory concentration * * * * * * 真菌实验室技术 真 菌 概 述 真菌的概念 具有真正细胞核，产生孢子，不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸取养料，能进行有性和（或）无性繁殖，具有细胞壁的有机体。 真菌的形态 菌丝 无隔菌丝 有隔菌丝 假菌丝 真菌的形态 菌丝 真菌的形态 孢子 无性孢子 关节孢子（裂殖） 芽生孢子（芽殖） 孢囊孢子 分生孢子（大分生孢子，小分生孢子） 有性孢子 休眠孢子囊 卵孢子 接合孢子 子囊孢子